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多重PCR方法检测锦鲤疱疹病毒基因
被引量：
5
1
作者
乌日琴
陈芳
+3 位作者
张艺宜
刘芸莉
刘中勇
林志雄
《中国动物检疫》
CAS
2011年第11期39-43,共5页
根据对已报道的PCR检测方法灵敏性评价,以常用KHV病毒PCR检测的目的基因KHVSphI片段(AY568590)、KHV5/9(AF411803)和KHVTK基因(AJ535112)作为靶基因,设计并选择3对特异性引物建立的多重PCR检测体系用于KHV病毒多基因的检测。本研究建立...
根据对已报道的PCR检测方法灵敏性评价,以常用KHV病毒PCR检测的目的基因KHVSphI片段(AY568590)、KHV5/9(AF411803)和KHVTK基因(AJ535112)作为靶基因,设计并选择3对特异性引物建立的多重PCR检测体系用于KHV病毒多基因的检测。本研究建立的多重PCR体系具有较高的特异性,能够特异性扩增出KHVSphI片段290bp、KHV5/9片段484bp和KHVTK基因片段409bp,对锦鲤和鲤鱼的另外一种病毒性病原鲤春毒血症病毒检测结果为阴性。多重KHV病毒PCR体系检测KHVSphI、KHV5/9和KHVTK基因片段单一模板的检测下限分别为:10fg、100fg和100fg,在相同模板浓度的情况下,KHVSphI、KHV5/9和KHVTK基因片段同时被检出的检测下限为100fg。对KHV病毒感染组织的检测结果表明,多重KHV病毒PCR检测结果与常规PCR检测结果基本吻合,在多重PCR检测体系中KHVTK基因片段检测的灵敏度高于检验检疫行业标准方法。结果表明,多重KHV病毒PCR检测方法能够快速、准确和灵敏地检测KHV病毒基因。
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关键词
检测
锦鲤疱疹病毒
多重PCR
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职称材料
牙鲆T细胞抗原受体(TCR)β链同源cDNA的克隆
被引量：
1
2
作者
乌日琴
张培军
+2 位作者
李军
徐芃
徐永立
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2003年第4期85-91,共7页
从牙鲆外周血淋巴细胞cDNA文库中克隆TCRβ1319bp同源cDNA序列并对其基因结构进行生物信息学分析。RT-PCR其编码区为942bp,编码314个氨基酸,编码区包括V、D、J和C区4个基因片段。TCRVβ片段主要包括从21～115位氨基酸残基的95个氨基酸序...
从牙鲆外周血淋巴细胞cDNA文库中克隆TCRβ1319bp同源cDNA序列并对其基因结构进行生物信息学分析。RT-PCR其编码区为942bp,编码314个氨基酸,编码区包括V、D、J和C区4个基因片段。TCRVβ片段主要包括从21～115位氨基酸残基的95个氨基酸序列,Jβ区与哺乳动物的Jβ区高度保守,在位于Vβ和Jβ之间的Dβ区中没有发现8碱基保守序列(GGACAGGG),CDR3β氨基酸序列为GTRILYE。牙鲆TCRCβ片段共有179个氨基酸残基,缺失位于Cβ细胞外区和临近区域的2个5～9氨基酸弹性区域。牙鲆TCRCβ片段的铰链区有6个氨基酸残基,缺少半胱氨酸位点,含Lys271保守位点。经RT-PCR检测,在脾、外周血和前肾中都发现TCRβ的表达,肌肉和肝中均未克隆到目的片段。
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关键词
牙鲆
T细胞抗原受体β链
TCR-β基因
cDNA末端快速扩增方法
T细胞受体
克隆
鱼类免疫学
疾病治疗
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职称材料
实时荧光核酸恒温扩增技术检测食品中金黄色葡萄球菌的方法评价
被引量：
4
3
作者
李桂金
宋晓礁
+2 位作者
张銮
李洪宽
乌日琴
《食品安全质量检测学报》
CAS
北大核心
2021年第12期4852-4857,共6页
目的以传统国标培养法作为参比方法,评价实时荧光核酸恒温扩增检测(real-time simultaneous amplification and testing, SAT)方法检测食品中金黄色葡萄球菌的能力。方法依据GB 4789.10—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色...
目的以传统国标培养法作为参比方法,评价实时荧光核酸恒温扩增检测(real-time simultaneous amplification and testing, SAT)方法检测食品中金黄色葡萄球菌的能力。方法依据GB 4789.10—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》对SAT法检测食品中金黄色葡萄球菌的能力进行评价。分别检测纯培养物、人工污染样品以及实际样品来评价试剂盒的灵敏度、特异性、假阴性率、假阳性率和准确度,同时采取2种方法的显著性差异分析,确定最终结果。结果 SAT法灵敏度为100%,纯培养物检出限为10^(3) CFU/mL,人工污染检出限灵敏度为10^(3) CFU/mL,假阴性率为0、假阳性率为2.9%;金黄色葡萄球菌的特异性符合要求。结论 SAT检测方法灵敏度高、特异性好,假阳性率、假阴性率、准确度等检测结果全部达标,并且检测时间短,适用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测。
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关键词
实时荧光核酸恒温扩增检测
灵敏度
特异性
金黄色葡萄球菌
准确度
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职称材料
题名
多重PCR方法检测锦鲤疱疹病毒基因
被引量：
5
1
作者
乌日琴
陈芳
张艺宜
刘芸莉
刘中勇
林志雄
机构
广东出入境检验检疫局技术中心
华南农业大学动物科学系
出处
《中国动物检疫》
CAS
2011年第11期39-43,共5页
基金
国家质量监督检验检疫总局科技项目(国检科2007IK014)资助
文摘
根据对已报道的PCR检测方法灵敏性评价,以常用KHV病毒PCR检测的目的基因KHVSphI片段(AY568590)、KHV5/9(AF411803)和KHVTK基因(AJ535112)作为靶基因,设计并选择3对特异性引物建立的多重PCR检测体系用于KHV病毒多基因的检测。本研究建立的多重PCR体系具有较高的特异性,能够特异性扩增出KHVSphI片段290bp、KHV5/9片段484bp和KHVTK基因片段409bp,对锦鲤和鲤鱼的另外一种病毒性病原鲤春毒血症病毒检测结果为阴性。多重KHV病毒PCR体系检测KHVSphI、KHV5/9和KHVTK基因片段单一模板的检测下限分别为:10fg、100fg和100fg,在相同模板浓度的情况下,KHVSphI、KHV5/9和KHVTK基因片段同时被检出的检测下限为100fg。对KHV病毒感染组织的检测结果表明,多重KHV病毒PCR检测结果与常规PCR检测结果基本吻合,在多重PCR检测体系中KHVTK基因片段检测的灵敏度高于检验检疫行业标准方法。结果表明,多重KHV病毒PCR检测方法能够快速、准确和灵敏地检测KHV病毒基因。
关键词
检测
锦鲤疱疹病毒
多重PCR
Keywords
Detection
Kio herpesvirus
Multiplex PCR
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
牙鲆T细胞抗原受体(TCR)β链同源cDNA的克隆
被引量：
1
2
作者
乌日琴
张培军
李军
徐芃
徐永立
机构
中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放实验室
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2003年第4期85-91,共7页
基金
973规划(G1999012003
G1999012006)资助项目。
文摘
从牙鲆外周血淋巴细胞cDNA文库中克隆TCRβ1319bp同源cDNA序列并对其基因结构进行生物信息学分析。RT-PCR其编码区为942bp,编码314个氨基酸,编码区包括V、D、J和C区4个基因片段。TCRVβ片段主要包括从21～115位氨基酸残基的95个氨基酸序列,Jβ区与哺乳动物的Jβ区高度保守,在位于Vβ和Jβ之间的Dβ区中没有发现8碱基保守序列(GGACAGGG),CDR3β氨基酸序列为GTRILYE。牙鲆TCRCβ片段共有179个氨基酸残基,缺失位于Cβ细胞外区和临近区域的2个5～9氨基酸弹性区域。牙鲆TCRCβ片段的铰链区有6个氨基酸残基,缺少半胱氨酸位点,含Lys271保守位点。经RT-PCR检测,在脾、外周血和前肾中都发现TCRβ的表达,肌肉和肝中均未克隆到目的片段。
关键词
牙鲆
T细胞抗原受体β链
TCR-β基因
cDNA末端快速扩增方法
T细胞受体
克隆
鱼类免疫学
疾病治疗
Keywords
Paralichthys oliveaceus, T cell antigen receptor β-chain, TCRβ gene, cDNA
分类号
Q953 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
实时荧光核酸恒温扩增技术检测食品中金黄色葡萄球菌的方法评价
被引量：
4
3
作者
李桂金
宋晓礁
张銮
李洪宽
乌日琴
机构
张家口市食品药品投诉举报中心(
张家口健垣科技有限公司
出处
《食品安全质量检测学报》
CAS
北大核心
2021年第12期4852-4857,共6页
基金
张家口科技冬奥重点科研项目(19120002D)。
文摘
目的以传统国标培养法作为参比方法,评价实时荧光核酸恒温扩增检测(real-time simultaneous amplification and testing, SAT)方法检测食品中金黄色葡萄球菌的能力。方法依据GB 4789.10—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》对SAT法检测食品中金黄色葡萄球菌的能力进行评价。分别检测纯培养物、人工污染样品以及实际样品来评价试剂盒的灵敏度、特异性、假阴性率、假阳性率和准确度,同时采取2种方法的显著性差异分析,确定最终结果。结果 SAT法灵敏度为100%,纯培养物检出限为10^(3) CFU/mL,人工污染检出限灵敏度为10^(3) CFU/mL,假阴性率为0、假阳性率为2.9%;金黄色葡萄球菌的特异性符合要求。结论 SAT检测方法灵敏度高、特异性好,假阳性率、假阴性率、准确度等检测结果全部达标,并且检测时间短,适用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测。
关键词
实时荧光核酸恒温扩增检测
灵敏度
特异性
金黄色葡萄球菌
准确度
Keywords
real-time simultaneous amplification and testing
sensitivity
specificity
Staphylococcus aureus
accuracy
分类号
TS207.4 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
多重PCR方法检测锦鲤疱疹病毒基因
乌日琴
陈芳
张艺宜
刘芸莉
刘中勇
林志雄
《中国动物检疫》
CAS
2011
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
牙鲆T细胞抗原受体(TCR)β链同源cDNA的克隆
乌日琴
张培军
李军
徐芃
徐永立
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2003
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
实时荧光核酸恒温扩增技术检测食品中金黄色葡萄球菌的方法评价
李桂金
宋晓礁
张銮
李洪宽
乌日琴
《食品安全质量检测学报》
CAS
北大核心
2021
4
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职称材料
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