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circRNA001131通过结合miR-25-3p抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达 被引量:9
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作者 潘蓉 杨静 +7 位作者 张铭 朱杰宁 袁淑菁 李晖 杨莹 严钰敏 符永恒 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-8,共8页
目的:研究环形RNA(circRNA)001131对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)纤维化表型的影响及分子机制。方法:采用Masson三色染色法对腹主动脉缩窄(AAC)手术诱导的心肌重构大鼠心肌进行胶原纤维的染色观察。利用芯片检测AAC手术诱导的大鼠心肌中circ... 目的:研究环形RNA(circRNA)001131对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)纤维化表型的影响及分子机制。方法:采用Masson三色染色法对腹主动脉缩窄(AAC)手术诱导的心肌重构大鼠心肌进行胶原纤维的染色观察。利用芯片检测AAC手术诱导的大鼠心肌中circRNA表达谱的变化。RT-qPCR检测AAC大鼠心肌及血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导的大鼠CFs中circRNA001131的表达。利用放线菌素D和RNase R实验检测circRNA001131的稳定性。利用重组circRNA001131腺病毒(rAd-circRNA001131)感染大鼠CFs,检测CFs中纤维化相关基因Ⅰ型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和肌动蛋白α2(Acta2)的mRNA和蛋白表达。双萤光素酶报告基因实验验证circRNA001131与miR-25-3p的结合作用。结果:RT-qPCR结果证实,circRNA001131在AAC手术诱导的大鼠心肌和Ang-Ⅱ处理的大鼠CFs中表达增强。放线菌素D和RNase R实验结果显示,circRNA001131与其宿主基因--第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(Pten)mRNA相比,降解水平明显降低。过表达circRNA001131可显著抑制大鼠CFs中纤维化相关基因Col1a1和Col3a1的表达。双萤光素酶报告基因实验证实circRNA001131与miR-25-3p间存在结合作用,miR-25-3p可以减弱circRNA001131对大鼠CFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论:circRNA001131在心肌纤维化中表达增强,并通过结合miR-25-3p发挥抑制心肌纤维化的作用。 展开更多
关键词 环形RNA001131 微小RNA-25-3p 心肌纤维化 心肌成纤维细胞
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环状RNA circ_0036176结合miR-218-5p发挥抑制心肌纤维化的作用 被引量:7
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作者 黄智琪 严钰敏 +5 位作者 郭晶 郭继深 朱杰宁 方咸宏 徐金东 单志新 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期61-69,共9页
【目的】探究环形RNAcirc_0036176对心肌纤维化表型的调控作用。【方法】通过RT-qPCR检测人心肌组织(包括18例器官捐赠健康志愿者和28例心力衰竭患者)中circ_0036176及其宿主基因MYO9A的表达水平。利用血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)处理人心房... 【目的】探究环形RNAcirc_0036176对心肌纤维化表型的调控作用。【方法】通过RT-qPCR检测人心肌组织(包括18例器官捐赠健康志愿者和28例心力衰竭患者)中circ_0036176及其宿主基因MYO9A的表达水平。利用血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)处理人心房肌成纤维细胞(HAFs),RT-qPCR检测circ_0036176和MYO9A的表达水平。放线菌素D和RNaseR处理,鉴定circ_0036176的典型环状结构。使用circ_0036176腺病毒在HAFs中实现充分过表达,mRNA及蛋白水平检测纤维化相关基团的表达差异。利用双萤光素酶报告基因实验和RNA反义纯化技术(RAP)筛选可与circ_0036176有效结合的miRNA。利用C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)研究miR-218-5p是否介导circ_0036176对心肌纤维化表型的调节作用。【结果】Circ_0036176在心衰心肌中表达增加(P<0.001),但在Ang-Ⅱ诱导的HAFs纤维化细胞模型中,宿主基因及该circRNA的表达一致下调(P<0.01)。放线菌素D和RNaseR实验证实circ_0036176具有典型的环形RNA稳定性。在HAFs中充分过表达circ_0036176后,纤维化相关基因表达均有所下降(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验与RAP实验证实miR-218-5p与circ_0036176间存在结合作用。mCFs中转染miR-218-5p促进了纤维化相关基团的表达,并可有效抵抗circ_0036176的纤维化抑制作用。【结论】Circ_0036176在心衰病人的心肌组织中表达上调,并可通过吸附miR-218-5p的方式来抑制心肌纤维化。 展开更多
关键词 环状RNA 心肌纤维化 心肌成纤维细胞 微小RNA
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核内miR-199b-5p通过上调CDK9表达促进心肌细胞肥大 被引量:5
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作者 易芷瑶 赵安职 +6 位作者 张铭 曾妮 朱杰宁 杨莹 严钰敏 郭惠明 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期193-201,共9页
目的:研究核内微小RNA-199b-5p(miR-199b-5p)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制。方法:利用RT-qPCR检测健康人与心衰患者心肌组织中miR-199b-5p的表达水平。通过核质分离及RT-qPCR技术确定miR-199b-5p在人心肌AC16细胞中的核质分布。原... 目的:研究核内微小RNA-199b-5p(miR-199b-5p)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制。方法:利用RT-qPCR检测健康人与心衰患者心肌组织中miR-199b-5p的表达水平。通过核质分离及RT-qPCR技术确定miR-199b-5p在人心肌AC16细胞中的核质分布。原代分离培养C57BL/6乳小鼠心室肌细胞(NMVCs),转染miR-199b-5p mimic,利用RT-qPCR和Western blot检测心房钠尿肽(ANP)、MYH7/β-肌球蛋白重链(β-MHC)和细胞周期蛋白依赖性激酶9(CDK9)表达。敲减NMVCs中CDK9基因表达,检测其对miR-199b-5p诱导的心肌细胞肥大相关基因表达的影响。双萤光素酶报告基因实验确定miR-199b-5p对CDK9基因的转录激活作用及与其启动子区的结合作用。通过ChIP-PCR实验验证miR-199b-5p通过募集RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)和p300参与CDK9基因的转录激活。结果:RT-qPCR结果显示心衰患者心肌中miR-199b-5p表达增加。核质分离和RT-qPCR结果显示人心肌AC16细胞中miR-199b-5p在胞核中富集存在。转染miR-199b-5p mimic能显著提高NMVCs中ANP、MYH7/β-MHC和CDK9表达。抑制CDK9表达可逆转miR-199b-5p的促心肌细胞肥大作用。双萤光素酶报告基因实验显示miR-199b-5p可增加CDK9基因的转录激活,miR-199b-5p与CDK9基因启动子区存在特异的结合位点。ChIP-PCR实验显示miR-199b-5p能募集PolⅡ和p300到CDK9基因启动子区,参与CDK9基因的转录激活。结论:核内miR-199b-5p通过转录激活CDK9基因发挥促进心肌细胞肥大作用。 展开更多
关键词 微小RNA-199b-5p 细胞周期蛋白依赖性激酶9 心肌细胞肥大
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FGF7通过上调SOD2抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达 被引量:2
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作者 黄宇晴 温艺红 +6 位作者 张铭 朱杰宁 杨莹 严钰敏 易芷瑶 曾妮 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期611-618,共8页
目的:研究成纤维细胞生长因子7(FGF7)调控心肌纤维化相关基因表达的作用机制。方法:利用mRNA表达谱芯片检测心衰患者心肌组织与健康对照心肌组织以及重组FGF7腺病毒感染小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)和正常对照mCFs中差异表达的基因。血管... 目的:研究成纤维细胞生长因子7(FGF7)调控心肌纤维化相关基因表达的作用机制。方法:利用mRNA表达谱芯片检测心衰患者心肌组织与健康对照心肌组织以及重组FGF7腺病毒感染小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)和正常对照mCFs中差异表达的基因。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导mCFs建立心肌纤维化的细胞模型。流式细胞术检测过表达FGF7对mCFs细胞周期的影响。利用重组FGF7腺病毒感染mCFs,RT-qPCR及Western blot检测FGF7、Ⅰ型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和肌动蛋白α2(Acta2)等纤维化相关基因的表达,并检测蛋白激酶B(PKB/Akt)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的活化情况。用siRNA沉默mCFs中超氧化物歧化酶2(SOD2)的表达或用AMPK抑制剂compound C抑制mCFs中AMPK的活性后,检测过表达FGF7的mCFs中心肌纤维化相关基因表达的变化。结果:心衰患者心肌组织及AngⅡ诱导的mCFs中FGF7的表达显著降低(P<0.05)。过表达FGF7不影响mCFs的细胞周期,但可降低mCFs中Col1a1、Col3a1和Acta2的表达(P<0.05)。过表达FGF7的mCFs中SOD2表达和磷酸化AMPK水平增加(P<0.05),但磷酸化Akt水平无显著变化(P>0.05)。沉默SOD2可逆转FGF7抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用,而compound C可减弱FGF7上调SOD2表达和抑制纤维化相关基因表达的作用。结论:FGF7通过激活AMPK来增加SOD2表达,从而发挥抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子7 超氧化物歧化酶2 心肌成纤维细胞 心肌纤维化
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