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人胰岛素样生长因子-1的体外抗肝纤维化活性 被引量:10
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作者 万爱妮 徐栋生 +3 位作者 蔡燕飞 陈蕴 金坚 李华钟 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期476-482,共7页
探讨人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的体外抗肝纤维化作用。检测IGF-1对人正常肝细胞L-02增殖及生长周期的影响;建立CCl_4诱导的肝细胞损伤模型,探究IGF-1抗肝细胞损伤活性;以TGF-β1诱导的肝星状细胞HSC-T6为体外肝纤维化研究模型,检测IG... 探讨人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的体外抗肝纤维化作用。检测IGF-1对人正常肝细胞L-02增殖及生长周期的影响;建立CCl_4诱导的肝细胞损伤模型,探究IGF-1抗肝细胞损伤活性;以TGF-β1诱导的肝星状细胞HSC-T6为体外肝纤维化研究模型,检测IGF-1对HSC-T6细胞中纤维化相关蛋白表达水平及对胞内TGF-β1/Smad信号通路的影响。结果显示,IGF-1可解除TGF-β1对L-02生长的抑制作用,提高CCl4损伤L-02的细胞存活率,降低HSC-T6细胞纤维化相关蛋白表达水平,抑制TGF-β1/Smad信号通路中Smad3的磷酸化。结果表明,IGF-1能够促进肝细胞增殖,保护肝细胞免受损伤,干预TGF-β1/Smad信号通路,抑制胞外基质ECM合成,从而发挥抗肝纤维化效果。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子-1 转化生长因子-Β1 肝细胞 肝星状细胞 肝纤维化
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硫氧还蛋白促进人胰岛素样生长因子-1在大肠杆菌中高效可溶表达 被引量:3
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作者 万爱妮 徐栋生 +3 位作者 蔡燕飞 陈蕴 金坚 李华钟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期50-57,共8页
为实现人胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)在大肠杆菌中的高效可溶表达,获得大量具生物活性的IGF-1。应用融合PCR技术构建trx-igf1融合基因,克隆至p ET30a载体。重组载体pET30a-Trx-IGF-1转化大肠杆菌C43(DE3),... 为实现人胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)在大肠杆菌中的高效可溶表达,获得大量具生物活性的IGF-1。应用融合PCR技术构建trx-igf1融合基因,克隆至p ET30a载体。重组载体pET30a-Trx-IGF-1转化大肠杆菌C43(DE3),并进行条件优化大量表达可溶性蛋白Trx-IGF-1。利用His标签纯化表达产物,对纯化蛋白进行Western blot与生物活性分析。构建的pET30a-Trx-IGF-1重组载体转化大肠杆菌C43(DE3)后,在30℃培养条件下1 mmol/L IPTG诱导表达5 h,获得大量以可溶形式表达的融合蛋白Trx-IGF-1;采用Ni离子亲和层析,获得纯度达90%以上的融合蛋白,经Western blot检测具有IGF-1抗原活性。生物学活性检测显示,融合蛋白Trx-IGF-1能明显促进NIH3T3细胞增殖及细胞周期进展。本研究应用的载体蛋白Trx,能实现在大肠杆菌中高效可溶表达具生物活性的IGF-1,为包涵体蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达提供借鉴。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子-1 硫氧还蛋白 大杨杆菌C43(DE3) 可溶 生物活性
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表达HSA/IL2的重组CHO细胞的无血清培养基优化研究 被引量:2
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作者 缪亚娜 熊文典 +4 位作者 万爱妮 张晶晶 蔡燕飞 陈蕴 金坚 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期95-101,共7页
优化适合重组CHO细胞生长及表达人血清白蛋白与白介素2(HSA/IL2)的低成本无血清悬浮培养基。以无血清悬浮培养基M1为基础,考察了3种不同质量浓度(1.0、2.5、5.0、10.0 g/L)的蛋白水解物(酵母提取物(YE)、大豆蛋白胨(Soy)及胰蛋白胨(Tyr)... 优化适合重组CHO细胞生长及表达人血清白蛋白与白介素2(HSA/IL2)的低成本无血清悬浮培养基。以无血清悬浮培养基M1为基础,考察了3种不同质量浓度(1.0、2.5、5.0、10.0 g/L)的蛋白水解物(酵母提取物(YE)、大豆蛋白胨(Soy)及胰蛋白胨(Tyr))对CHO细胞生长、细胞周期、细胞凋亡及HSA/IL2融合蛋白表达的影响。5 g/L的YE促进细胞生长,提高HSA/IL2表达量的效果最佳。流加培养过程中,在含5.0 g/L YE的培养基中CHO细胞密度可达9.95×10~6cells/mL,HSA/IL2表达量提高至104.06 mg/L,分别是对照组的1.42倍和1.51倍。细胞对数生长期时,YE可以提高细胞周期进展而利于细胞生长;细胞表达期时,YE可以提高细胞G1期比例,延长细胞表达期时间而利于HSA/IL2表达。 展开更多
关键词 CHO细胞 培养基优化 蛋白水解物 细胞周期
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转化生长因子βⅡ型受体胞外域融合蛋白的体内抗肝纤维化活性研究 被引量:2
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作者 蔡燕飞 万爱妮 +1 位作者 陈蕴 金坚 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期246-252,共7页
研究人血清白蛋白与转化生长因子βⅡ型受体胞外域的融合蛋白(HSA-eTGFBR2)的体内抗肝纤维化作用,以期寻找更加稳定的抗肝纤维化药物。通过CCl_4诱导构建小鼠肝纤维化模型,设正常组、模型组、阳性组、eTGFBR2治疗组、HSA-eTGFBR2治疗组... 研究人血清白蛋白与转化生长因子βⅡ型受体胞外域的融合蛋白(HSA-eTGFBR2)的体内抗肝纤维化作用,以期寻找更加稳定的抗肝纤维化药物。通过CCl_4诱导构建小鼠肝纤维化模型,设正常组、模型组、阳性组、eTGFBR2治疗组、HSA-eTGFBR2治疗组和HSA组。经过苏木精-伊红染色、血清肝功能指标活性检测及Western blot等方法鉴定各组抗肝纤维化效果。结果显示:(1)CCl_4能引起肝脏结构紊乱、肝细胞坏死、胶原纤维增生,损伤肝功能,诱导纤维化;(2)HSA-eTGFBR2及其单体均能明显改善肝纤维化症状,减轻肝细胞损伤及胶原沉积,改善肝功能,降低肝脏中纤维化标志物α-SMA和COL I的表达水平,其改善肝纤维化效果与单体药物相当,而白蛋白几乎没有治疗效果;(3)与单体药物相比,HSA-eTGFBR2融合蛋白在降低给药频率的情况下能取得相当的治疗效果。综上表明HSA-eTGFBR2融合蛋白具有良好的抗肝纤维化效果,与单体药物相比,融合蛋白药物在低注射频率下也能取得较好的治疗效果,表明该融合蛋白药物半衰期更长、更稳定,具有更优的应用前景。 展开更多
关键词 转化生长因子βⅡ型受体胞外域 肝纤维化 人血清白蛋白融合蛋白
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