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实时荧光定量PCR构建牛源粪肠球菌esp标准曲线
1
作者
樊杰
孙康永杰
+4 位作者
魏亚琴
杨宇泽
万学瑞
丁巨财
王川
《中兽医学杂志》
2019年第11期13-15,共3页
为了快速检测牛源粪肠球菌,本实验建立了粪肠球菌esp基因实时荧光定量PCR标准曲线。首先参照esp基因在Genbank中的序列进行引物的设计与合成,利用PCR扩增目的基因并将其连接到pMD18-T载体上,并转化进入大肠埃希菌TOP10感受态细胞,经测...
为了快速检测牛源粪肠球菌,本实验建立了粪肠球菌esp基因实时荧光定量PCR标准曲线。首先参照esp基因在Genbank中的序列进行引物的设计与合成,利用PCR扩增目的基因并将其连接到pMD18-T载体上,并转化进入大肠埃希菌TOP10感受态细胞,经测序鉴定成功后,提取重组质粒并以10倍系列稀释后作为标准模板,进行实时荧光定量PCR。成功建立了牛源粪肠球菌esp基因荧光定量PCR标准曲线及其直线回归方程,所得熔解曲线峰值单一,表明引物具有很好的特异性;标准曲线相关系数r^2=0.9998,说明线性关系良好,目的基因的荧光定量PCR的标准曲线构建成功。本研究为快速检测牛源粪肠球菌奠定了基础。
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关键词
粪肠球菌
ESP
实时荧光定量PCR
标准曲线
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职称材料
PRNP过表达MAC-T细胞的构建及其对细胞黏附侵袭的影响
2
作者
张钊
颜丽娇
+7 位作者
杨宇泽
苟惠天
万学瑞
马小军
丁巨财
彭婕
王川
张小丽
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2023年第4期37-45,共9页
【目的】研究PRNP过表达对牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)黏附、侵袭的影响。【方法】利用慢病毒载体技术构建PRNP慢病毒过表达载体并建立稳定PRNP过表达MAC-T细胞系;应用实时荧光定量PCR和Western Blot对过表达MAC-T细胞系进行验证;随后用MRS...
【目的】研究PRNP过表达对牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)黏附、侵袭的影响。【方法】利用慢病毒载体技术构建PRNP慢病毒过表达载体并建立稳定PRNP过表达MAC-T细胞系;应用实时荧光定量PCR和Western Blot对过表达MAC-T细胞系进行验证;随后用MRSA感染MAC-T细胞和PRNP过表达MAC-T细胞系,比较PRNP过表达MAC-T细胞和野生型MAC-T细胞在黏附侵袭生理特性的差异。【结果】成功构建pLVML-PRNP慢病毒表达载体和稳定的PRNP+-MAC-T细胞系;黏附侵袭结果表明MRSA对过表达PRNP的MAC-T细胞黏附侵袭能力显著低于对照组,值得注意的是,MRSA在感染PRNP+-MAC-T细胞后的6 h内,未发生明显的侵袭现象,直至感染6 h后其侵袭率才明显上升,8 h达到峰值,但是仍显著低于MRSA对MAC-T细胞的侵袭率。【结论】PRNP过表达能够降低MRSA对细胞的黏附侵袭能力。
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关键词
慢病毒载体
PRNP
MAC-T细胞
MRSA
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职称材料
题名
实时荧光定量PCR构建牛源粪肠球菌esp标准曲线
1
作者
樊杰
孙康永杰
魏亚琴
杨宇泽
万学瑞
丁巨财
王川
机构
甘肃农业大学动物医学院
甘肃省科学院生物研究所厌氧微生物中心
北京市畜牧总站
出处
《中兽医学杂志》
2019年第11期13-15,共3页
基金
甘肃农业大学2019年学生科研训练计划(SRTP,201903046)
甘肃农业大学盛彤笙基金(GSAU-STS-1522)
+1 种基金
甘肃省科技计划项目重点研发计划(18YF1NA077)
甘肃农业大学动物医学院教研产学支持项目(JYCX-KX004)。
文摘
为了快速检测牛源粪肠球菌,本实验建立了粪肠球菌esp基因实时荧光定量PCR标准曲线。首先参照esp基因在Genbank中的序列进行引物的设计与合成,利用PCR扩增目的基因并将其连接到pMD18-T载体上,并转化进入大肠埃希菌TOP10感受态细胞,经测序鉴定成功后,提取重组质粒并以10倍系列稀释后作为标准模板,进行实时荧光定量PCR。成功建立了牛源粪肠球菌esp基因荧光定量PCR标准曲线及其直线回归方程,所得熔解曲线峰值单一,表明引物具有很好的特异性;标准曲线相关系数r^2=0.9998,说明线性关系良好,目的基因的荧光定量PCR的标准曲线构建成功。本研究为快速检测牛源粪肠球菌奠定了基础。
关键词
粪肠球菌
ESP
实时荧光定量PCR
标准曲线
Keywords
bovine enterococcus faecalis
esp
real-time fluorescence quantitative PCR
The standard curve
分类号
S855.11 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
PRNP过表达MAC-T细胞的构建及其对细胞黏附侵袭的影响
2
作者
张钊
颜丽娇
杨宇泽
苟惠天
万学瑞
马小军
丁巨财
彭婕
王川
张小丽
机构
甘肃农业大学动物医学院
北京市畜牧总局
出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2023年第4期37-45,共9页
基金
甘肃农业大学动物医学院学科建设基金项目(GSAU-XKJS-2018-074)。
文摘
【目的】研究PRNP过表达对牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)黏附、侵袭的影响。【方法】利用慢病毒载体技术构建PRNP慢病毒过表达载体并建立稳定PRNP过表达MAC-T细胞系;应用实时荧光定量PCR和Western Blot对过表达MAC-T细胞系进行验证;随后用MRSA感染MAC-T细胞和PRNP过表达MAC-T细胞系,比较PRNP过表达MAC-T细胞和野生型MAC-T细胞在黏附侵袭生理特性的差异。【结果】成功构建pLVML-PRNP慢病毒表达载体和稳定的PRNP+-MAC-T细胞系;黏附侵袭结果表明MRSA对过表达PRNP的MAC-T细胞黏附侵袭能力显著低于对照组,值得注意的是,MRSA在感染PRNP+-MAC-T细胞后的6 h内,未发生明显的侵袭现象,直至感染6 h后其侵袭率才明显上升,8 h达到峰值,但是仍显著低于MRSA对MAC-T细胞的侵袭率。【结论】PRNP过表达能够降低MRSA对细胞的黏附侵袭能力。
关键词
慢病毒载体
PRNP
MAC-T细胞
MRSA
Keywords
lentiviral vector
PRNP
MAC-T cells
MRSA
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
实时荧光定量PCR构建牛源粪肠球菌esp标准曲线
樊杰
孙康永杰
魏亚琴
杨宇泽
万学瑞
丁巨财
王川
《中兽医学杂志》
2019
0
在线阅读
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职称材料
2
PRNP过表达MAC-T细胞的构建及其对细胞黏附侵袭的影响
张钊
颜丽娇
杨宇泽
苟惠天
万学瑞
马小军
丁巨财
彭婕
王川
张小丽
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
2023
0
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职称材料
已选择
0
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