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6种商品化PRRSV美洲经典毒株和高致病性毒株双重实时荧光定量PCR检测试剂盒性能比对
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作者 高晓龙 栗云鹏 +5 位作者 李志军 张启龙 傅彩霞 高敏 雷琪莉 王林 《中国动物检疫》 2025年第2期80-86,共7页
为评价不同品牌猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲经典毒株和高致病性毒株双重实时荧光定量PCR检测试剂盒的性能,选择6种市售商品化试剂盒,对其敏感性、特异性、重复性以及临床样品检测符合率等指标进行比对分析。结果显示:对于PRRSV... 为评价不同品牌猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲经典毒株和高致病性毒株双重实时荧光定量PCR检测试剂盒的性能,选择6种市售商品化试剂盒,对其敏感性、特异性、重复性以及临床样品检测符合率等指标进行比对分析。结果显示:对于PRRSV美洲经典毒株VR2332和高致病性毒株JXA1,A品牌试剂盒最低检测限均可达到1 copy/μL,D品牌试剂盒最低检测限分别为100和1000 copies/μL,其他品牌试剂盒最低检测限为1~10 copies/μL;6种试剂盒对猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪细小病毒(PPV)的检测均为阴性,特异性良好;对不同浓度模板进行检测,除1个变异系数为6.5%以外,其余均小于5.0%,重复性较好。临床样品检测结果显示,F品牌试剂盒阴性样品检测符合率为95%,其余试剂盒为100%;D品牌试剂盒阳性样品检测符合率为50%,其余试剂盒为100%。综上所述,6种试剂盒的特异性、重复性均较好,但其敏感性及临床检测性能存在一定差异。建议在使用荧光定量PCR试剂盒检测PRRSV前,对其性能进行科学评估,选用性能良好的试剂盒以满足检测需求。本研究为检测机构和养殖场选择PRRSV检测试剂盒提供了依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲经典毒株 高致病性毒株 pcr检测试剂盒 性能对比
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弓形虫PCR检测试剂盒的组装和初步应用 被引量:9
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作者 任科研 李琳 +3 位作者 苑淑贤 尹荣兰 杨金生 姚新华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期92-94,共3页
研制弓形虫PCR检测试剂盒,观察临床应用效果。根据GenBank公布的弓形虫MIC3基因序列,设计合成1对特异性引物,对PCR反应条件进行优化,分别对试剂盒的特异性、敏感性、重复性、稳定性和保存期进行研究,之后进行临床试验。该诊断试剂盒能... 研制弓形虫PCR检测试剂盒,观察临床应用效果。根据GenBank公布的弓形虫MIC3基因序列,设计合成1对特异性引物,对PCR反应条件进行优化,分别对试剂盒的特异性、敏感性、重复性、稳定性和保存期进行研究,之后进行临床试验。该诊断试剂盒能扩增出弓形虫特异性基因MIC3片段,与猪球虫、贾第虫、猪旋毛虫和隐孢子虫无交叉反应;该检测方法最低能够检测到10个弓形虫速殖子的DNA,不同批次的试剂盒对同一样品检测和同一批次对不同样品检测,有较高的重复性和稳定性,且常温下可保存1年以上,临床应用效果显著。该检测试剂盒对弓形虫病早期诊断、流行病学调查和卫生检疫提供了检测手段。 展开更多
关键词 弓形虫 pcr检测试剂盒 组装 应用
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小鹅瘟和雏鹅新型病毒性肠炎二联PCR检测试剂盒组装和初步应用 被引量:2
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作者 任科研 姚新华 +2 位作者 苑淑贤 李琳 邵洪泽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第1期14-16,共3页
本试验旨在研制小鹅瘟和雏鹅新型病毒性肠炎二联PCR检测试剂盒,观察临床应用效果。根据小鹅瘟和鹅病毒性肠炎基因序列,设计合成一对特异性引物,对PCR反应条件进行优化,并分别对试剂盒的特异性、敏感性、重复性和保存期进行研究,之后进... 本试验旨在研制小鹅瘟和雏鹅新型病毒性肠炎二联PCR检测试剂盒,观察临床应用效果。根据小鹅瘟和鹅病毒性肠炎基因序列,设计合成一对特异性引物,对PCR反应条件进行优化,并分别对试剂盒的特异性、敏感性、重复性和保存期进行研究,之后进行临床扩大试验。该二联PCR诊断试剂盒能扩增出预期的小鹅瘟375bp核酸片段和鹅病毒性肠炎223bp核酸片段,与鸭瘟病毒、鹅副黏病毒无交叉反应;最低能检测到小鹅瘟病毒104 ELD50/mL,雏鹅新型病毒性肠炎病毒2.5×10-1ELD50;不同批次的试剂盒对同一样品检测结果一致;常温下至少可保存5个月;临床应用效果显著。该二联PCR检测试剂盒能够对小鹅瘟和雏鹅病毒性肠炎早期诊断、流行病学调查和卫生检疫提供了检测手段。 展开更多
关键词 小鹅瘟 雏鹅新型病毒性肠炎 pcr检测试剂盒 研制 应用
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基于非洲猪瘟病毒标准物质的荧光PCR检测试剂盒初步评价 被引量:4
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作者 马龙 尹才 +3 位作者 李莉 李杰 王晓亮 李知新 《中国动物检疫》 CAS 2021年第4期108-111,共4页
为探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)标准物质作为试剂盒评价体系的可行性,比较了市场上5种主流品牌ASFV荧光PCR检测试剂盒的检测性能。使用ASFV P72基因核酸标准物质作为模板,根据5种试剂盒说明书分别进行相应的荧光定... 为探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)标准物质作为试剂盒评价体系的可行性,比较了市场上5种主流品牌ASFV荧光PCR检测试剂盒的检测性能。使用ASFV P72基因核酸标准物质作为模板,根据5种试剂盒说明书分别进行相应的荧光定量PCR检测,结合扩增曲线、Ct值,分析不同试剂盒的敏感性、可重复性以及所需反应时间。结果显示:5种试剂盒的阴性、阳性对照均成立,最低检测限均为5.9×10^(-1)拷贝/μL;4个厂家的试剂盒线性关系R2>0.98,其中最优的R^(2)=0.994,离散度最小;各试剂盒的实际反应耗时与理论反应耗时均有一定差异(0.20~0.96 h)。结果表明,各生产厂家使用P72基因作为靶基因研制的ASFV荧光PCR检测试剂盒都可以使用ASFV标准物质作为评价体系,来评判试剂盒的检测性能。本试验为各实验室不同样品检测的ASFV荧光PCR检测试剂盒选择提供了一种可用的评价方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 标准物质 荧光pcr检测试剂盒 比对
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羊痘病毒PCR检测方法的建立和试剂盒的研制 被引量:8
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作者 张志成 陈丽华 +3 位作者 陆静静 张大淦 戴薇 陈钟鸣 《中国动物检疫》 CAS 2011年第2期44-46,共3页
根据GenBank上已发表的羊痘病毒(CPV)的全基因序列,设计并合成了一对能特异性扩增羊痘病毒的引物,扩增产物大小约为445bp。通过对PCR方法的优化,建立了检测羊痘病毒的PCR方法,并研制出检测试剂盒。同时对试剂盒的敏感性,特异性和稳定性... 根据GenBank上已发表的羊痘病毒(CPV)的全基因序列,设计并合成了一对能特异性扩增羊痘病毒的引物,扩增产物大小约为445bp。通过对PCR方法的优化,建立了检测羊痘病毒的PCR方法,并研制出检测试剂盒。同时对试剂盒的敏感性,特异性和稳定性进行了研究。实验结果表明,该试剂盒具有良好的敏感性和特异性,稳定性在-20℃至少可以保存一年。 展开更多
关键词 羊痘病毒 pcr检测试剂盒 敏感性 特异性
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干燥型荧光PCR试剂盒检测食源性致病菌研究 被引量:3
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作者 赵现锋 牛娜 +8 位作者 王舒 容海燕 马淑棉 张恒 黎绍基 林镜中 曾静 吕敬章 赵芳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第7期1826-1836,共11页
目的研究干燥型荧光PCR试剂盒检测副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7和单增李斯特菌3种食源性致病菌的灵敏度、特异性和检测人工污染样品情况。方法目标菌和非目标菌接种至血平板, 36℃培养过夜,目标菌比浊至0.5 McF(麦氏单位), 10倍... 目的研究干燥型荧光PCR试剂盒检测副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7和单增李斯特菌3种食源性致病菌的灵敏度、特异性和检测人工污染样品情况。方法目标菌和非目标菌接种至血平板, 36℃培养过夜,目标菌比浊至0.5 McF(麦氏单位), 10倍连续稀释后提取DNA,进行灵敏度研究;非目标菌直接提取DNA后检测,进行特异性研究;用高、中、低3个浓度目标菌液人工污染食品样品,按国标方法培养后用干燥型荧光PCR试剂盒检测。结果副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7和单增李斯特菌的最低检测浓度分别为140、380和7900 CFU/mL。3种目标菌人工污染食品样品的最低检测浓度分别为1.2 CFU/25 g、5.1CFU/25 g、10 CFU/25 g。每种试剂盒仅对目标菌株的检测结果呈阳性,非目标菌株均呈阴性。结论新型干燥型荧光PCR检测试剂盒具有较好的灵敏度和良好的特异性,适用于食品中副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7和单增李斯特菌的检测。 展开更多
关键词 干燥型荧光pcr检测试剂盒 检测 食源性致病菌
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6种非洲猪瘟荧光PCR试剂盒对比试验
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作者 彭苗苗 杜丽飞 +5 位作者 王慧 杨俊 邱美珍 刘伯承 周望平 危婷 《湖南畜牧兽医》 2021年第6期16-20,共5页
对5个厂家的6种非洲猪瘟荧光PCR试剂盒检测的敏感性和一致性进行综合比较,选取已知阳性的核酸样品作为待测样品进行梯度稀释,每组设置三个平行对照,使用A1、A2、B、C、D、E6种试剂盒,按照各厂家试剂盒说明书对所有样品进行非洲猪瘟荧光... 对5个厂家的6种非洲猪瘟荧光PCR试剂盒检测的敏感性和一致性进行综合比较,选取已知阳性的核酸样品作为待测样品进行梯度稀释,每组设置三个平行对照,使用A1、A2、B、C、D、E6种试剂盒,按照各厂家试剂盒说明书对所有样品进行非洲猪瘟荧光PCR检测及结果判定,并从检出ct值的样品数量、检出核酸最低拷贝浓度、检出ct值的平均值和检出ct值的离散度四个维度来综合评估对6种试剂盒的敏感性和一致性。结果显示:检测灵敏度方面,由高至低的排名为试剂盒D>试剂盒C>试剂盒A2>试剂盒E>试剂盒B>试剂盒A1;检测一致性方面,试剂盒D>试剂盒C>试剂盒A2>试剂盒E>试剂盒B=试剂盒A1。综合6种试剂盒的敏感性和一致性来看,试剂盒D的灵敏度和一致性最好,试剂盒C稍低于试剂盒D,但差距很小,几乎在同一水平,试剂盒A2灵敏度和一致性次之,其余三种试剂盒E>试剂盒B>试剂盒A1。 展开更多
关键词 非洲猪瘟荧光pcr检测试剂盒 敏感性测试 一致性
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