透明颤菌血红蛋白基因(vgb)与monellin基因在毕赤酵母中的联合表达

1

作者 王清路 张玉军 +2 位作者 窦烨 李俏俏 周彩霞 《中国酿造》 CAS 北大核心 2008年第8期37-40,共4页

根据酵母偏爱密码子合成了monellin甜蛋白基因和vgb基因,然后构建了2种不同方式表达的载体,胞内表达的pPIC3.5KV和分泌表达的pPIC9KM。电击转化得到重组子GS115/pPIC9KM和GS115/pPIC9KM/pPIC3.5KV,通过PCR、SDS-PAGE及western blotting... 根据酵母偏爱密码子合成了monellin甜蛋白基因和vgb基因,然后构建了2种不同方式表达的载体,胞内表达的pPIC3.5KV和分泌表达的pPIC9KM。电击转化得到重组子GS115/pPIC9KM和GS115/pPIC9KM/pPIC3.5KV,通过PCR、SDS-PAGE及western blotting检测发现monellin甜蛋白基因和vgb基因成功整合进毕赤酵母基因组并成功表达,通过品尝和CO-差示光谱法证实其表达产物具有活性,用southern blotting对6株高产菌株进行拷贝数分析并未发现拷贝数与分泌蛋白产量之间存在明显的正相关。对比发现,含vgb基因菌株比未含菌株高甜度monellin的产量最高提高了20%,菌体密度平均提高了9%。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因 甜蛋白基因 毕赤酵母 拷贝数 外源基因

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透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在那西肽产生菌—活跃链霉菌中的表达 被引量：2

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作者 谢帅 周海娇 +2 位作者 田威 陈光 何建勇 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期490-494,共5页

目的将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)整合到那西肽产生菌—活跃链霉菌(Streptomyces actuo-sus)的染色体上进行表达,从而提高菌体对溶解氧的利用,提高那西肽的发酵产量。方法采用分子生物学方法构建了携带vgb的重组质粒pZV02,采用接合转移... 目的将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)整合到那西肽产生菌—活跃链霉菌(Streptomyces actuo-sus)的染色体上进行表达,从而提高菌体对溶解氧的利用,提高那西肽的发酵产量。方法采用分子生物学方法构建了携带vgb的重组质粒pZV02,采用接合转移的方法将其导入那西肽产生菌—活跃链霉菌中,采用抗生素抗性标记筛选法获得了基因重组菌株。结果在低溶氧的发酵条件下,重组菌株的那西肽产量显著高于对照菌株。结论 vgb在活跃链霉菌中的表达,可以改善菌体对溶解氧的利用,在低溶氧的条件下可以提高发酵产物那西肽的产量。 展开更多

关键词 活跃链霉菌 那西肽 透明颤菌血红蛋白基因

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透明颤菌血红蛋白基因的克隆及其在林可链霉菌中的表达 被引量：6

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作者 杨洪涛 刘瑞华 +1 位作者 何建勇 曾红 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期657-662,共6页

目的通过将透明颤菌血红蛋白基因vgb克隆到林可链霉菌染色体黑色素生物合成基因m elC位点,使m elC基因被破坏失活,vgb基因实现表达同时提高林可霉素产量。方法构建大肠杆菌-链霉菌重组质粒pYHT04,通过接合转移实验将重叠延伸PCR得到的... 目的通过将透明颤菌血红蛋白基因vgb克隆到林可链霉菌染色体黑色素生物合成基因m elC位点,使m elC基因被破坏失活,vgb基因实现表达同时提高林可霉素产量。方法构建大肠杆菌-链霉菌重组质粒pYHT04,通过接合转移实验将重叠延伸PCR得到的具有红霉素抗性基因启动子的透明颤菌血红蛋白基因,以双交换的方式整合进林可链霉菌黑色素生物合成基因m elC中。采用不同装瓶量摇瓶发酵,HPLC检测发酵液中林可霉素含量。结果重组菌株颜色变浅,CO结合差光谱显示在420 nm处有明显吸收峰,随着装瓶量的增加重组菌株发酵液中林可霉素效价与对照菌株相比降低幅度较小。结论重组菌株m elC基因失活不能继续合成黑色素,vgb基因得到表达并表现出生物学功能,限氧条件下重组菌株发酵液中林可霉素效价高于对照菌株,有希望应用于工业发酵生产。 展开更多

关键词 林可链霉菌 林可霉素 透明颤菌血红蛋白基因vgb 黑色素

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响应面优化转透明颤菌血红蛋白基因里氏木霉液体发酵产纤维素酶的培养条件 被引量：2

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作者 严琳 钟红梅 +4 位作者 左婕 陈智慧 罗又才 陈啟月 伍红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第3期663-672,共10页

研究采用响应面法并以滤纸酶活力(filter paper activity,FPA)作为响应值对转透明颤菌血红蛋白基因的里氏木霉(Trichoderma reesei)Tu6-VHb菌株液体发酵产纤维素酶的发酵条件进行优化。根据单因素试验结果设计P-B试验,筛选出影响Tu6-VH... 研究采用响应面法并以滤纸酶活力(filter paper activity,FPA)作为响应值对转透明颤菌血红蛋白基因的里氏木霉(Trichoderma reesei)Tu6-VHb菌株液体发酵产纤维素酶的发酵条件进行优化。根据单因素试验结果设计P-B试验,筛选出影响Tu6-VHb菌株发酵产酶的3个显著因素:吐温-80含量、发酵液体积(250 mL三角瓶发酵)、氮源浓度。用最陡爬坡路径法逼近最大响应值区域,运用响应面B-B试验设计确定3个显著因素之间的交互作用和最佳发酵条件。结果显示,Tu6-VHb产纤维素酶的最佳发酵条件是:吐温-80含量0.39%,发酵液体积61.32mL(250 mL三角瓶发酵),氮源浓度0.87%。经优化后,Tu6-VHb菌株发酵产纤维素酶酶活力达51.72U/mL,与模型预测值51.94U/mL相近,较优化前该菌株酶活力(39.984U/mL)提高了29.35%,是未转入透明颤菌血红蛋白基因的里氏木霉(Trichoderma reesei)Tu6菌株酶活力(35.904U/mL)的1.44倍。 展开更多

关键词 里氏木霉 纤维素酶 响应面法 液体发酵 透明颤菌血红蛋白

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转透明颤菌血红蛋白基因黄芪毛状根急性毒性研究

5

作者 王子艳 杜旻 +2 位作者 吴晓俊 周吉燕 胡之璧 《食品与药品》 CAS 2010年第9期315-317,共3页

目的初步评价转透明颤菌血红蛋白基因(vgb)黄芪毛状根的安全性。方法对非转基因黄芪毛状根、转vgb黄芪毛状根及黄芪药材进行急性毒性试验。结果 ig转vgb黄芪毛状根的LD50为59.58 g/kg体重,95%可信限为55.97～63.39 g/kg体重,平均可信限... 目的初步评价转透明颤菌血红蛋白基因(vgb)黄芪毛状根的安全性。方法对非转基因黄芪毛状根、转vgb黄芪毛状根及黄芪药材进行急性毒性试验。结果 ig转vgb黄芪毛状根的LD50为59.58 g/kg体重,95%可信限为55.97～63.39 g/kg体重,平均可信限为59.58±3.71 g/kg体重。结论急性毒性实验表明,黄芪甲苷用量相同条件下,转基因黄芪毛状根符合安全用药的规定。 展开更多

关键词 黄芪 透明颤菌血红蛋白 转基因 毒性

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透明颤菌血红蛋白基因在生黑葡萄糖酸杆菌中的克隆与表达

6

作者 陈羽 徐威 +2 位作者 刘华松 位星 张世野 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期577-580,共4页

目的在生黑葡萄糖酸杆菌中克隆并表达透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla Hemoglobin gene,vgb)。方法构建重组质粒p UC19-vgb并电转化生黑葡萄糖酸杆菌。采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfonate,SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳和一氧化... 目的在生黑葡萄糖酸杆菌中克隆并表达透明颤菌血红蛋白基因(Vitreoscilla Hemoglobin gene,vgb)。方法构建重组质粒p UC19-vgb并电转化生黑葡萄糖酸杆菌。采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfonate,SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳和一氧化碳(carbon monoxide,CO)-示差光谱进行血红蛋白表达和生物活性测定。结果 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示有大量与目的蛋白大小相当(约15 ku)的蛋白表达。CO-示差光谱在420 nm处有一吸收峰,显示重组质粒p UC19-vgb成功转化入生黑葡萄糖酸杆菌,并表达具有生物活性的透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla Hemoglobin,VHb)。结论成功构建vgb重组质粒,并实现在生黑葡萄糖酸杆菌中表达VHb。 展开更多

关键词 生黑葡萄糖酸杆菌 透明颤菌血红蛋白 转化

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透明颤菌血红蛋白基因对苏氨酸发酵生产的影响

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作者 井庆川 武彬 +4 位作者 石天虹 刘雪兰 魏祥法 阎佩佩 刘瑞亭 《山东农业科学》 2011年第4期96-99,共4页

将透明颤菌血红蛋白(VHb)基因转化至苏氨酸发酵基因工程株E.coli中,研究了导入VHb基因对苏氨酸发酵生产的影响。结果表明,改造后苏氨酸发酵菌对营养物质的利用效率增加。以不同碳源发酵时,摇床培养提高苏氨酸产量28.7%～55.4%,以不同氮... 将透明颤菌血红蛋白(VHb)基因转化至苏氨酸发酵基因工程株E.coli中,研究了导入VHb基因对苏氨酸发酵生产的影响。结果表明,改造后苏氨酸发酵菌对营养物质的利用效率增加。以不同碳源发酵时,摇床培养提高苏氨酸产量28.7%～55.4%,以不同氮源发酵时提高产酸7.4%～36.1%。导入VHb基因对菌体生长动力学的影响较小,但对苏氨酸产酸动力学曲线作用较显著。基因改造提高了菌株的生长与苏氨酸合成能力,并能缓解摇床转速较低时供氧对发酵的限制。 展开更多

关键词 透明颤菌 血红蛋白 苏氨酸发酵

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透明颤菌血红蛋白基因在产TRAIL蛋白大肠杆菌中的克隆表达

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作者 杨凌超 孙爱友 +3 位作者 沈亚领 魏东芝 龚毅 马昱澍 《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第8期925-929,共5页

为解决大肠杆菌高密度发酵生产TRA IL过程中的供氧矛盾,提高菌体的发酵密度,在大肠杆菌中引入透明颤菌血红蛋白基因(vgb)。聚合酶链反应(PCR)检验和CO差光谱法检验表明:vgb基因能够在C 600(pBV 220-TRA IL)中表达并受溶氧调控,重组菌CT... 为解决大肠杆菌高密度发酵生产TRA IL过程中的供氧矛盾,提高菌体的发酵密度,在大肠杆菌中引入透明颤菌血红蛋白基因(vgb)。聚合酶链反应(PCR)检验和CO差光谱法检验表明:vgb基因能够在C 600(pBV 220-TRA IL)中表达并受溶氧调控,重组菌CTV具有良好的遗传稳定性。3.7 L发酵罐实验表明:在同样的发酵条件下,含vgb基因的重组菌CTV的最高菌体密度为对照菌的1.64倍,达到50.6 g/L,乙酸积累为对照菌的55.6%,TRA IL蛋白产量提高了70%,达到2.8 g/L。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因(vgb) TRAIL 大肠杆菌 发酵 乙酸

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密码子优化及透明颤菌血红蛋白共表达提高耐热脂肪酶在毕赤酵母的表达 被引量：2

9

作者 王建荣 刘丹妮 +6 位作者 夏雨 杨玲 刘金山 唐业 陈丽芝 黄佳乐 李阳源 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第19期135-140,共6页

根据毕赤酵母密码子的偏好性,通过在线软件对Thermomyces lanuginosus脂肪酶基因(tll)和透明颤菌血红蛋白基因(vhb)进行密码子优化。优化后的脂肪酶基因(tll-opt)和透明颤菌血红蛋白基因(vhb-opt)中碱基GC含量分别由原来的46%提高到49%... 根据毕赤酵母密码子的偏好性,通过在线软件对Thermomyces lanuginosus脂肪酶基因(tll)和透明颤菌血红蛋白基因(vhb)进行密码子优化。优化后的脂肪酶基因(tll-opt)和透明颤菌血红蛋白基因(vhb-opt)中碱基GC含量分别由原来的46%提高到49%和42%提高到51%,碱基A、T、C、G均匀分布,减少了AT和GC富集区,利于tll-opt和vhb-opt基因在毕赤酵母X33中的表达。将tll和tll-opt连接到表达载体p PICZαA并转入毕赤酵母X33中。摇瓶培养条件下,含有tll和tll-opt重组工程菌的最大酶活力分别为7 U/m L和16 U/m L。50 L发酵罐培养条件下,含有tll和tll-opt重组工程菌的最大酶活力分别为201 U/m L和430 U/m L。为了进一步提高含tll-opt重组工程菌的表达酶活性,将vhb-opt转入该重组工程菌得到工程菌VHb^+(含有tll-opt和vhb-opt)。重组工程菌VHb+在摇瓶培养条件下最大酶活力为23 U/m L,分别是优化后基因和原始基因最大表达酶活力的1.39倍和3.28倍。重组工程菌VHb+在50 L发酵罐瓶培养条件下最大酶活力为610 U/m L,分别是优化后基因和原始基因最大表达酶活力的1.41倍和3.03倍。 展开更多

关键词 密码子优化 脂肪酶 透明颤菌血红蛋白 高密度发酵

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透明颤菌血红蛋白基因在酶工程中的应用 被引量：2

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作者 王兴吉 佟新伟 +1 位作者 刘文龙 张杰 《食品与发酵科技》 CAS 2017年第6期1-4,共4页

透明颤菌的血红蛋白(VHb)具有结合氧的特性,可使专性好氧的革兰氏阴性菌透明颤菌在贫氧环境中生长。目前,VHb可以在很多宿主细胞中表达,通过促进氧的输送增强呼吸和能量代谢,以提高许多有益的代谢产物的产量。本文综述了VHb的结构与功能... 透明颤菌的血红蛋白(VHb)具有结合氧的特性,可使专性好氧的革兰氏阴性菌透明颤菌在贫氧环境中生长。目前,VHb可以在很多宿主细胞中表达,通过促进氧的输送增强呼吸和能量代谢,以提高许多有益的代谢产物的产量。本文综述了VHb的结构与功能,以及vgb基因在产酶工程菌中的应用及存在的问题,并对vgb基因在酶工程领域的应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 透明颤菌 血红蛋白 代谢产物 基因工程 酶工程

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敲除ptsG基因及共表达透明颤菌血红蛋白提高大肠杆菌SHMT产量 被引量：1

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作者 韩琴 徐新星 +4 位作者 王儒昕 李鑫 闫达中 吴菁 刘军 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第2期119-125,共7页

利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌BL21(DE3)的ptsG基因,得到ptsG基因缺失菌株BL21(DE3)ΔptsG。构建重组质粒,得到表达大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)工程菌株BL21(DE3)/pET-glyA、BL21(DE3)ΔptsG/... 利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌BL21(DE3)的ptsG基因,得到ptsG基因缺失菌株BL21(DE3)ΔptsG。构建重组质粒,得到表达大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)工程菌株BL21(DE3)/pET-glyA、BL21(DE3)ΔptsG/pET-glyA,及共表达SHMT和透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)工程菌株BL21(DE3)ΔptsG/pET-SV。在LB培养基中,BL21(DE3)ΔptsG/pET-glyA菌株与BL21(DE3)/pET-glyA菌株生长情况没有明显差异,BL21(DE3)ΔptsG/pET-SV菌株稳定期的OD 600 nm值比BL21(DE3)ΔptsG/pET-glyA菌株提高了21.3%,在LBG培养基中,稳定期BL21(DE3)ΔptsG/pET-glyA菌株OD600 nm值比BL21(DE3)/pET-glyA菌株提高了19.4%,BL21(DE3)ΔptsG/pET-SV菌株OD600 nm值比BL21(DE3)ΔptsG/pET-glyA菌株提高了21.5%。在LBG培养基中,经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导,与对照菌株BL21(DE3)/pET-28a相比较,两种单表达工程菌株产SHMT活力分别是其6.4倍和7.7倍,共表达工程菌株产SHMT活力是其9.6倍。实验结果表明,敲除ptsG基因能够增加大肠杆菌在含葡萄糖培养基中的生长量及SHMT表达量,共表达VHb能进一步提高菌株生长量和SHMT产量。 展开更多

关键词 RED同源重组 丝氨酸羟甲基转移酶 透明颤菌血红蛋白 ptsG基因 共表达

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高产莫能菌素肉桂地链霉菌的透明颤菌vgb基因异源表达 被引量：4

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作者 李欣颖 张善飞 +2 位作者 刘旻炜 黄子瑄 孙付保 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1-9,共9页

肉桂地链霉菌(Streptomyces cinnamonensis)发酵产生的聚醚类抗生素莫能菌素(Monensin)因其环保且高效的特性而被广泛应用在医药、农业等领域,但莫能菌素实际生产中普遍的低氧条件严格限制了肉桂地链霉菌发酵莫能菌素水平。该文在前期... 肉桂地链霉菌(Streptomyces cinnamonensis)发酵产生的聚醚类抗生素莫能菌素(Monensin)因其环保且高效的特性而被广泛应用在医药、农业等领域,但莫能菌素实际生产中普遍的低氧条件严格限制了肉桂地链霉菌发酵莫能菌素水平。该文在前期整合表达莫能菌素生物合成基因簇中途径特异性正向调控基因(monH、monRⅡ)基础上,尝试通过异源整合表达透明颤菌血红蛋白基因vgb,以期通过改善菌株摄取溶氧能力来提高莫能菌素产量。结果显示,在40 mmol/L Ca^(2+)、供受体菌比例100∶1和培养18 h覆盖抗生素条件下,接合转移效率提高3倍;成功将基因vgb与莫能菌素生物合成途径特异性调控基因monH/monRⅡ进行串联整合,得到工程菌2110-monH-vgb和2110-monH-monRⅡ-vgb,其摇瓶生物量在高限氧条件下稍有提高(6%),但发酵效价分别较异源表达前提高18.0%和21.3%;后者在5 L罐水平生物量较异源表达前略有提高,发酵效价高达11.5 kU/mL,较出发菌提高47.3%。通过优化遗传操作系统并用于肉桂地链霉菌发酵产莫能菌素基因工程改造,成功获得有效提高莫能菌素发酵效价的vgb异源串联整合表达菌,为其后续的工业应用奠定基础。 展开更多

关键词 肉桂地链霉菌 莫能菌素 接合转移 异源表达 透明颤菌血红蛋白基因vgb

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利用血红蛋白基因提高短小芽孢杆菌在低氧条件下的碱性蛋白酶产量 被引量：3

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作者 张风豪 王海燕 +4 位作者 何明雄 李羚锐 杨春晖 葛建 张义正 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期755-760,共6页

将透明颤菌血红蛋白基因vgb成熟肽编码区序列分别与枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）P43双启动子和短小芽孢杆菌（B. pumilus）碱性蛋白酶基因启动子wBp连接,利用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4分别构建组成型表达质粒pSUP43Vgb... 将透明颤菌血红蛋白基因vgb成熟肽编码区序列分别与枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）P43双启动子和短小芽孢杆菌（B. pumilus）碱性蛋白酶基因启动子wBp连接,利用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4分别构建组成型表达质粒pSUP43Vgb和pSUwBpVgb,将其分别转化短小芽孢杆菌UN-31-C-11.SDS-PAGE和CO差异光谱检测表明,融合基因在UN-31-C-11中均得到了表达,并且表达质粒使重组菌株在低氧条件下的生长量在对数生长后期超过对照菌株20%以上,同时促进了短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的表达,其产量高于对照30%以上. 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因(vgb) 基因启动子 穿梭载体 短小芽孢杆菌 基因表达

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透明颤菌vgb基因整合型大肠杆菌的培养特性 被引量：1

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作者 陈新爱 徐志南 +1 位作者 王芳 岑沛霖 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第1期124-128,共5页

透明颤菌血红蛋白(VHb)是一种氧调节、氧结合蛋白,其基因vgb的表达在转录水平上受氧调控.大肠杆菌E.coliBV是采用基因同源重组方法将vgb基因整合到基因工程常用宿主菌E.coliBL21中构建得到的.研究了不同价态的铁离子对同源重组菌的生长... 透明颤菌血红蛋白(VHb)是一种氧调节、氧结合蛋白,其基因vgb的表达在转录水平上受氧调控.大肠杆菌E.coliBV是采用基因同源重组方法将vgb基因整合到基因工程常用宿主菌E.coliBL21中构建得到的.研究了不同价态的铁离子对同源重组菌的生长特性及VHb合成的影响,研究表明,0.2mmol/L的二价铁离子具有促进VHb表达从而刺激菌体细胞生长的作用.在0.1L/h低通气量条件下,E.coliBV分别进行间歇培养和流加培养,低溶氧刺激VHb在短时间内迅速大量合成,改善了细胞内氧的传递性能,使生长期分别延长到25h和45h,生物量(DCW)分别达到9.6g/L和26g/L. 展开更多

关键词 透明颤菌 vgb基因 基因同源重组 血红蛋白 大肠杆菌 基因表达 基因工程 微生物培养

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转vgb基因银腺杂种杨的耐涝性 被引量：6

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作者 李义良 苏晓华 +2 位作者 张冰玉 黄秦军 张香华 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第7期26-31,共6页

对导入透明颤菌血红蛋白(vitreoscilla hemoglobin,VHb)基因vgb银腺杂种杨进行Southern印记杂交和RT-PCR检测,证实vgb基因已整合到杨树基因组中,并在转录水平上得到表达。在温室对4个转基因株系及对照盆栽扦插苗进行模拟持续淹水胁迫试... 对导入透明颤菌血红蛋白(vitreoscilla hemoglobin,VHb)基因vgb银腺杂种杨进行Southern印记杂交和RT-PCR检测,证实vgb基因已整合到杨树基因组中,并在转录水平上得到表达。在温室对4个转基因株系及对照盆栽扦插苗进行模拟持续淹水胁迫试验,研究淹水条件下植株的生长及生理性状。结果表明,随着淹水时间的延长苗木逐渐死亡,对照植株在淹水17天后死亡率达66.67%,而4个转基因株系死亡率均低于50.00%,其中T81最低,只有25.00%;同时4个转基因株系在淹水胁迫时能够保持较高的叶绿素含量,并且膜质过氧化物MDA含量均低于对照植株;涝渍胁迫下转基因株系生长受抑制程度低于对照植株。说明在淹水胁迫下vgb基因的表达增强了银腺杂种杨叶绿素含量的积累,进而促进了转基因植株的生长,提高了转基因株系对淹水的忍受能力。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因(vgb) 耐涝性 银腺杂种杨

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putA与vgb基因对反式-4-羟基-L-脯氨酸产量的影响 被引量：3

16

作者 张胜利 林凡 +3 位作者 刘合栋 张震宇 孙付保 夏紫薇 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1307-1316,共10页

反式-4-羟基-L-脯氨酸是在自然界中分布最广泛的一种羟脯氨酸,在医药、化工、食品和美容业等领域有广泛应用。为了在生物转化法生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的过程中减少菌体对底物脯氨酸的降解,利用Red/ET同源重组系统敲除putA基因,并比... 反式-4-羟基-L-脯氨酸是在自然界中分布最广泛的一种羟脯氨酸,在医药、化工、食品和美容业等领域有广泛应用。为了在生物转化法生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的过程中减少菌体对底物脯氨酸的降解,利用Red/ET同源重组系统敲除putA基因,并比较野生型菌株与缺失型菌株在不同培养基中的反式-4-羟基-L-脯氨酸产量,再引入vgb基因,考察该基因对反式-4-羟基-L-脯氨酸产量的影响。结果表明:putA基因的缺失能阻止菌体降解脯氨酸;碳源充足的情况下,GC培养基更有利于反式-4-羟基-L-脯氨酸的生产;putA基因缺失型菌株能将被消耗的脯氨酸全部转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸;vgb基因的存在能显著提高反式-4-羟基-L-脯氨酸的产量。 展开更多

关键词 反式-4-羟基-L-脯氨酸 大肠杆菌 生物转化 基因敲除 透明颤菌血红蛋白

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缺失ATP合酶和插入VHb基因对钝齿棒杆菌谷氨酸产量的影响 被引量：2

17

作者 郑方亮 于亮 +2 位作者 牟晓丛 刘鹏 刘宏生 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第7期131-136,共6页

为了提高钝齿棒杆菌生产谷氨酸的产量,以谷氨酸生产菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)T6-13为出发菌株,利用同源重组技术使其缺失ATP合酶基因(atp)并进一步插入透明颤菌血红蛋白基因(VHb),得到两株重组菌株T6-13-Δatp和T6-13-Δa... 为了提高钝齿棒杆菌生产谷氨酸的产量,以谷氨酸生产菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)T6-13为出发菌株,利用同源重组技术使其缺失ATP合酶基因(atp)并进一步插入透明颤菌血红蛋白基因(VHb),得到两株重组菌株T6-13-Δatp和T6-13-Δatp-tac-VHb,通过检测重组菌株谷氨酸产量及生长情况可以看出,在发酵32 h后,atp基因缺失菌株较出发菌株谷氨酸产出累积量高27.76%,但atp基因缺失导致菌体生长缓慢且无法到达出发菌株稳定期浓度,而插入VHb基因的atp基因缺失菌株的谷氨酸产出累积量较出发菌株高36.91%,且菌体的生长速率及稳定期浓度与出发菌株基本一致。 展开更多

关键词 钝齿棒杆菌 谷氨酸 ATP合酶 透明颤菌血红蛋白

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多功能基因工程菌VG1(pTU14)产PHB的氮源代谢

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作者 于慧敏 尹进 +2 位作者 李红旗 杨胜利 沈忠耀 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 1999年第5期70-73,共4页

为降低PHB生产过程中的发酵成本和分离成本,以大肠杆菌为宿主成功构建了溶氧利用能力高且可诱导裂解破壁的新型PHB高产多功能基因工程菌VG1(pTU14)。由于该重组菌同时表达透明颤菌血红蛋白基因、λ噬菌体裂解基因及PHB合成基因这3种外... 为降低PHB生产过程中的发酵成本和分离成本,以大肠杆菌为宿主成功构建了溶氧利用能力高且可诱导裂解破壁的新型PHB高产多功能基因工程菌VG1(pTU14)。由于该重组菌同时表达透明颤菌血红蛋白基因、λ噬菌体裂解基因及PHB合成基因这3种外源基因,故其氮源代谢特性不同于一般的基因工程菌。实验证明,无机氮源和有机氮源,尤其是有机氮源的种类及浓度均对重组菌生长和PHB积累有重要影响,且二者之间存在很强的交互作用。进一步实验表明,重组菌VG1(pTU14)的最佳无机氮源为乙酸铵,优化质量浓度为2.0 g/L;最佳有机氮源为酵母浸膏粉,优化质量浓度为6.0 g/L。在0.03 g/L及0.4 g/L两种质量浓度下分析酵母浸膏粉中的17种氨基酸对重组菌生长和PHB积累的影响,表明无论在何种质量浓度水平下,精氨酸均是促进菌体生长和PHB积累的一种最重要的氨基酸;而谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸、色氨酸、脯氨酸等也均显著促进重组菌生长和PHB积累;但亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、胱氨酸等反而不利于菌体的生长和PHB的积累。 展开更多

关键词 透明颤菌血红蛋白基因 λ噬菌体裂解基因 PHB合成基因 氮源

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甲醇浓度和VHb蛋白表达对重组毕赤酵母生产SAM的影响 被引量：1

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作者 王永强 钱江潮 +2 位作者 储炬 郭美锦 张嗣良 《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第3期354-359,共6页

以插入AOX1启动子调控S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶/VHb表达单元的重组毕赤酵母为对象,研究了甲醇浓度及vgb表达对菌体生长、SAM产量及SAM合成酶活力的影响,同时也考察了vgb表达对胞内ATP含量及细胞活性的影响。结果表明:甲醇浓度(φ(CH3O... 以插入AOX1启动子调控S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶/VHb表达单元的重组毕赤酵母为对象,研究了甲醇浓度及vgb表达对菌体生长、SAM产量及SAM合成酶活力的影响,同时也考察了vgb表达对胞内ATP含量及细胞活性的影响。结果表明:甲醇浓度(φ(CH3OH))由0.008提高至0.016后,可提高菌体浓度、SAM产量及单位菌体SAM含量;当φ(CH3OH)=0.024时,SAM产量及单位菌体SAM含量与φ(CH3OH)=0.016时相当,而菌体浓度稍低于φ(CH3OH)=0.016时,高于φ(CH3OH)=0.008时的菌体浓度。提高甲醇浓度导致SAM合成酶活力降低,细胞死亡率增加,说明在所考察的重组菌中SAM合成酶的活性并不是SAM合成的限制因素。在上述3种甲醇浓度时,透明颤菌血红蛋白VHb表达都改善了细胞活性,并在较高甲醇浓度(0.016和0.024)时提高了胞内ATP含量。 展开更多

关键词 甲醇浓度 S-腺苷甲硫氨酸 透明颤菌血红蛋白 ATP 细胞活性

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提高产反式-4-羟脯氨酸工程菌产量的发酵策略 被引量：1

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作者 王晓姣 杨慧敏 +2 位作者 张震宇 孙付保 周豪 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期40-48,共9页

为了实现羟脯氨酸的高产,首先以缺陷型菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BH作为实验菌,通过单因素优化及正交试验,优化得到新的培养基配方及培养条件。其次通过基因工程手段引入透明颤菌血红蛋白VHB基因,构建菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-... 为了实现羟脯氨酸的高产,首先以缺陷型菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BH作为实验菌,通过单因素优化及正交试验,优化得到新的培养基配方及培养条件。其次通过基因工程手段引入透明颤菌血红蛋白VHB基因,构建菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BHV,进行高密度发酵。结果显示,发酵培养基为:麦芽糖10 g/L,甘油5 g/L,胰蛋白胨22 g/L,K2HPO44 g/L,FeSO4(Fe2+∶VC=1∶1)5 mmol/L,MgSO4·7H2O 1.7 g/L,Nacl 3 g/L,Cacl20.005 g/L;培养条件为:初始pH 8.5,温度30℃,接种体积分数4%,转速220 r/min。此条件下,菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BH羟脯氨酸产量约为1602 mg/L,约为优化前的1.4倍.在7 L罐发酵培养,菌株E.coli JM109ΔargB/pUC19-BHV的羟脯氨酸产量约为18.3 g/L,与JM109ΔargB/pUC19-BH相比,提高了13.2%,说明VHB基因的引入有利于羟脯氨酸产量提高. 展开更多

关键词 反式-4-羟脯氨酸 大肠杆菌工程菌 缺陷型 透明颤菌血红蛋白 发酵优化

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