实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌 被引量：12

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作者 荣策 赵彤彤 +3 位作者 许龙岩 刘宇 那晗 曹际娟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2012年第4期300-305,共6页

目的建立实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法基于鼠伤寒沙门氏菌II型限制酶基因,设计引物及Taqman探针,利用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果特异性探针可从25种血清型沙门氏菌(共49株)及11株阴性对... 目的建立实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法基于鼠伤寒沙门氏菌II型限制酶基因,设计引物及Taqman探针,利用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果特异性探针可从25种血清型沙门氏菌(共49株)及11株阴性对照菌株中检测出全部的11株鼠伤寒沙门氏菌。以鼠伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.998,扩增效率90%,最低检测浓度300cfu/mL。对已接种鼠伤寒沙门氏菌的4种模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致。结论此方法特异、灵敏、准确,适于食品中鼠伤寒沙门氏菌的检测。 展开更多

关键词 实时荧光pcr法 鼠伤寒沙门氏菌 TAQMAN探针 沙门氏菌属

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荧光PCR法检测妊娠孕晚期妇女B族链球菌感染的应用价值 被引量：12

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作者 马勇 李莉 《中国实用医药》 2016年第10期92-93,共2页

目的 通过几种方法对比检测B族链球菌（GBS）,探讨荧光PCR法在产前筛查B族链球菌感染检测中的临床应用价值和意义.方法 采集临床孕35~37周孕妇的阴道和直肠分泌物标本480例,用荧光PCR法、细菌培养法及基因测序法同时检测GBS,并对结果进... 目的 通过几种方法对比检测B族链球菌（GBS）,探讨荧光PCR法在产前筛查B族链球菌感染检测中的临床应用价值和意义.方法 采集临床孕35~37周孕妇的阴道和直肠分泌物标本480例,用荧光PCR法、细菌培养法及基因测序法同时检测GBS,并对结果进行分析.结果 荧光PCR法检测GBS阳性75例,阳性率为15.6%;细菌培养法检测GBS阳性40例,阳性率为8.3%,两种方法检测阳性率比较差异有统计学意义（P〈0.01）.荧光PCR法与基因测序法检测结果对比,荧光PCR法检测GBS正确率为93.3%（70/75）,灵敏度为100.0%（70/70）,特异性为98.8%（405/410）.结论 荧光PCR法检测GBS明显优于细菌培养法,与金标准基因测序法比对,其检测准确率、灵敏度、特异性都较高,是产前筛查GBS的最佳方法,值得临床推广应用. 展开更多

关键词 B族链球菌 荧光pcr法 细菌培养 基因测序

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参照多重PCR片段分析法进行实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因测定结果读取方法的确定

3

作者 张燕 蒙卓成 +4 位作者 邢欢 崔小花 杨柳 郑璇 戴尊孝 《四川精神卫生》 2022年第2期137-143,共7页

目的为解决实时荧光PCR法对三等位基因测定结果无法正常读取的问题,通过参照多重PCR片段分析法,确定实时荧光PCR法读取方法,实现临床对ABCB1三等位基因准确、简便且价格低廉的检测。方法收集西安市精神卫生中心2020年3月-2021年3月DNA样... 目的为解决实时荧光PCR法对三等位基因测定结果无法正常读取的问题,通过参照多重PCR片段分析法,确定实时荧光PCR法读取方法,实现临床对ABCB1三等位基因准确、简便且价格低廉的检测。方法收集西安市精神卫生中心2020年3月-2021年3月DNA样本2794例,抽取5%作为实验样本,分别进行实时荧光PCR法和多重PCR片段分析法测定。根据PCR曲线Ct值的比较以及多重PCR片段分析法碱基峰位强度的比较,对比分析两种方法的判读结果,对其中报告结果不相同的样本进行数据核查并确定PCR读取方法。结果共抽取139例样本,其中存在120例等位基因及19例三等位基因,实时荧光PCR法和多重PCR片段分析法对等位基因的检测结果完全一致。根据多重PCR片段分析结果,对19例三等位基因制定了实时荧光PCR法的读取方法:扩增曲线图中,当∣∣Ct._(G)-Ct._(T)∣-∣Ct._(G)-Ct._(A)∣∣<3,分别读取两组碱基Ct值小的碱基,将其组合形成判读结果;当∣∣Ct._(G)-Ct._(T)∣-∣Ct._(G)-Ct._(A)∣∣≥3,读取两组碱基Ct值最小的碱基,其纯合型即为判读结果。根据读取方法,修正实时荧光PCR法的测定结果为:1例G/G,1例A/A,4例T/G,5例T/A,8例T/T,与多重PCR片段分析法结果一致。结论通过多重PCR片段分析法制定实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因的读取方法,两者判读结果一致性良好。 展开更多

关键词 实时荧光pcr法 多重pcr片段分析 三等位基因 ABCB1

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应用实时荧光PCR法检测食品中的酿脓链球菌 被引量：4

4

作者 王远洋 刘钟栋 兰全学 《中国食品添加剂》 CAS 2018年第5期161-166,共6页

目的:建立一种简单、快速、准确的检测酿脓链球菌的方法,为食品中酿脓链球菌的检测提供依据和便利。方法:实验采用Taq Man探针法,针对酿脓链球菌DNase B基因设计引物探针,用特异性实验、灵敏性实验、模拟样品实验对该方法进行验证。结果... 目的:建立一种简单、快速、准确的检测酿脓链球菌的方法,为食品中酿脓链球菌的检测提供依据和便利。方法:实验采用Taq Man探针法,针对酿脓链球菌DNase B基因设计引物探针,用特异性实验、灵敏性实验、模拟样品实验对该方法进行验证。结果:该实时荧光PCR体系的特异性良好,酿脓链球菌的DNA扩增结果为阳性,链球菌属的其他细菌以及属外的常见菌DNA扩增均为阴性;灵敏性实验和模拟样品试验中最低检出限分别为50和23pg/μL,数量级一致,说明了该PCR体系在对含有肉类食品中酿脓链球菌的检测仍然保持有较高灵敏度。结论:目前国内单独的应用实时荧光PCR法对酿脓链球菌检测的文章比较少,本实验建立了检测酿脓链球菌的实时荧光PCR方法,特异性和灵敏性良好,实验过程省时省力,具有较高应用价值。 展开更多

关键词 酿脓链球菌 DNaseB基因 实时荧光pcr法 食品

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实时荧光PCR法与环介导等温扩增法检测食品中动物源性成分的比较 被引量：7

5

作者 李娟 丁清龙 +2 位作者 曾晓琮 陈科 周露 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第12期2908-2913,共6页

目的比较实时荧光PCR(real-time PCR)法及环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中动物源性成分,为食品安全监管部门动物源性成分鉴定提供准确、高效的检测方法。方法采用实时荧光PCR法及LAMP法分别对... 目的比较实时荧光PCR(real-time PCR)法及环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测食品中动物源性成分,为食品安全监管部门动物源性成分鉴定提供准确、高效的检测方法。方法采用实时荧光PCR法及LAMP法分别对市售肉及其制品进行牛、猪和鸡源性成分鉴定,并与标签明示的肉源成分比对,以准确性和时效性2个指标对上述2个方法进行评价。结果 Real-time PCR法检出4份样品与标签明示肉源不符,LAMP法检出5份样品与标签明示肉源不符,而16份样品中仅有1份样品2种方法检测结果不同。Real-time PCR法检测用时1.5 h,提取检测用DNA用时1.5 h,总用时3 h;而LAMP法检测用时45 min,提取检测用DNA用时20 min,总用时65 min。结论 LAMP法与Real-time PCR均具有较好的特异性、准确性,但LAMP法耗时短、成本低、操作简单,便于现场快速监督抽检。 展开更多

关键词 食品 动物源性成分 实时荧光pcr法 环介导等温扩增法

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实时荧光PCR法和国标法检测乳粉中单增李斯特菌的比较研究 被引量：7

6

作者 林玉双 蓝福胜 +2 位作者 廖燕萍 刘晓玲 周双辉 《食品安全质量检测学报》 CAS 2020年第24期9425-9429,共5页

目的探究实时荧光PCR法是否可用于实验室乳粉中单增李斯特菌的检测。方法依据GB4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》和能力验证作业指导书对乳粉中单增李斯特菌进行检测。利用实时荧光PCR法(re... 目的探究实时荧光PCR法是否可用于实验室乳粉中单增李斯特菌的检测。方法依据GB4789.30-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》和能力验证作业指导书对乳粉中单增李斯特菌进行检测。利用实时荧光PCR法(real-time fluorescent polymerase chain reaction,RT-PCR)对能力验证中的2个样品进行快速检测,同时采用VITEK2 Compact30全自动微生物鉴定系统对国标法中挑取的可疑菌落进行鉴定,比较国标法和RT-PCR法的检测结果。结果RT-PCR法和国标法对2个样品的检测结果一致,即样品CODE:FC02220028检出单增李斯特菌,样品CODE:FC02220098未检出单增李斯特菌。结论RT-PCR法可用于实验室乳粉中单增李斯特菌的检测。 展开更多

关键词 乳粉 单增李斯特菌 实时荧光pcr法

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山羊绒和绵羊毛混合物荧光PCR法测试研究 被引量：2

7

作者 李典典 《针织工业》 北大核心 2023年第3期86-88,共3页

根据GB/T 36433—2018《纺织品山羊绒和绵羊毛的混合物DNA定量分析荧光PCR法》标准,通过试验计算得出羊绒和羊毛的扩增效率分别为95.26%和98.60%,并以此对方法中用到的引物、探针和扩增条件等进行进一步验证。此外,结合固相萃取技术,探... 根据GB/T 36433—2018《纺织品山羊绒和绵羊毛的混合物DNA定量分析荧光PCR法》标准,通过试验计算得出羊绒和羊毛的扩增效率分别为95.26%和98.60%,并以此对方法中用到的引物、探针和扩增条件等进行进一步验证。此外,结合固相萃取技术,探究常规不过柱法、常规过柱法和试剂盒法3种不同前处理方法对羊绒和羊毛混合物样品测试结果的影响。结果表明:常规不过柱法有局限性,仅适用于颜色较浅的样品;而常规过柱法和试剂盒法在测试颜色较深的样品方面有一定的优势,在定性和定量方面结果比较一致;这3种方法可以满足试验者的不同需求,进一步提高试验效率。 展开更多

关键词 羊绒 羊毛 纤维定量分析 荧光pcr法 固相萃取 扩增效率

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实时荧光PCR法检测食品中芝麻过敏原成分

8

作者 谢文佳 冯波 +2 位作者 魏法山 程海芳 张羽翔 《现代食品》 2016年第15期108-109,共2页

食品安全是现代社会不容忽视的一个问题,也是食品质量最重要、最基本的组成部分,食物过敏就属于食品安全问题。本文阐述食品过敏机制和过敏原特点,并利用实时荧光PCR法检测食品中芝麻过敏原成分,以供相关人员参考。

关键词 荧光pcr法 检测 过敏原 芝麻

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实时荧光PCR法检测芝麻酱中的芝麻成分 被引量：1

9

作者 李娟 陈茵茵 +3 位作者 梅岩 陈雪华 王达 黄嘉文 《食品安全导刊》 2023年第11期129-131,共3页

利用实时荧光PCR法检测芝麻酱中的芝麻源性成分,以鉴定预包装产品的真伪。选取3份市售芝麻酱产品,其中1份标示不含芝麻成分,利用荧光定量PCR法进行检测。结果显示该法检测结果与产品标签相符,建立的检测方法可行。

关键词 芝麻酱 芝麻成分 实时荧光pcr法

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人类白细胞抗原-B27检测中实时荧光PCR法的应用价值

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作者 曾光 《浙江临床医学》 2014年第10期1640-1641,共2页

人类白细胞抗原（humanleucocyteantigen，HLA）是指一组位于人体细胞膜表面能够识别“自己”或者“非己”的抗原分子，是由位于人类6号染色体短臂上的一组主要组织相容性复合体基因编码，其中人类白细胞抗原-B27（HLA-B27）是HLA-B基... 人类白细胞抗原（humanleucocyteantigen，HLA）是指一组位于人体细胞膜表面能够识别“自己”或者“非己”的抗原分子，是由位于人类6号染色体短臂上的一组主要组织相容性复合体基因编码，其中人类白细胞抗原-B27（HLA-B27）是HLA-B基因座位上的一个重要等位基因。以往，检测HLA-B27主要有实时荧光PCR法、酶联免疫法、流式细胞术及微量细胞毒试验法。本文对实时荧光PCR法与流式细胞术在HLA-B27检测中的应用作一比较，旨在探讨实时荧光PCR法的可靠性。 展开更多

关键词 人类白细胞抗原-B27 荧光pcr法 检测 HLA-B27 应用 主要组织相容性复合体 6号染色体短臂 流式细胞术

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荧光PCR熔解曲线法快速检测耐多药结核菌的临床应用 被引量：3

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作者 张立 吴敏 侯志丽 《山东医药》 CAS 2014年第36期40-41,共2页

目的评价荧光PCR熔解曲线法快速检测耐多药结核菌的临床应用价值。方法选取157例结核病患者痰标本,培养阳性标本同时采取改良罗氏比例法、MGIT960液体培养法和荧光PCR熔解曲线法检测利福平和异烟肼的药物敏感性。结果三种方法对同一菌... 目的评价荧光PCR熔解曲线法快速检测耐多药结核菌的临床应用价值。方法选取157例结核病患者痰标本,培养阳性标本同时采取改良罗氏比例法、MGIT960液体培养法和荧光PCR熔解曲线法检测利福平和异烟肼的药物敏感性。结果三种方法对同一菌株的药物敏感性比较,差异无统计学意义(P均>0.05);荧光PCR熔解曲线法检测耐多药与MGIT960液体培养法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论荧光PCR熔解曲线法可用于耐多药结核菌的快速检测,为临床早期诊断、治疗提供依据。 展开更多

关键词 荧光pcr法 耐多药 结核菌 改良罗氏比例法

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实时荧光定量PCR结合培养法在细菌学室间质量评价中的应用 被引量：2

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作者 霍哲 任艳芳 +2 位作者 徐俊 张晶波 苗芳 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第4期1519-1523,共5页

目的评价培养法和实时荧光PCR法在细菌学质控样本中的检测应用。方法采用培养法和实时荧光PCR法分离鉴定30件质控考核致病菌,探讨快速、准确检测致病菌的理想方案。结果从鉴定结果和检测完成时间方面具体分析了其中5件质控标本,质控标本... 目的评价培养法和实时荧光PCR法在细菌学质控样本中的检测应用。方法采用培养法和实时荧光PCR法分离鉴定30件质控考核致病菌,探讨快速、准确检测致病菌的理想方案。结果从鉴定结果和检测完成时间方面具体分析了其中5件质控标本,质控标本1号、2号实时荧光PCR优于培养法,质控标本3号、4号培养法弥补了实时荧光PCR的局限性,质控标本5号培养法和实时荧光PCR结合应用,检出目标菌。结论培养法结合实时荧光PCR法能够优势互补,是快速准确检测致病菌的理想模式。 展开更多

关键词 室间质量评价 细菌鉴定 盲样考核 实时荧光pcr法

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牛奶β-乳球蛋白质实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：12

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作者 贾敏 张银志 +1 位作者 张亦凡 孙秀兰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期605-612,共8页

建立一种快速、特异、灵敏的Taqman实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法,用于牛奶主要过敏原β-乳球蛋白质的检测。根据Gen Bank登录的牛β-乳球蛋白质的DNA序列设计,合成一对特异性引物和探针。将扩增产物连接到p MD19-T载体上,制备... 建立一种快速、特异、灵敏的Taqman实时荧光定量PCR（real-time PCR）方法,用于牛奶主要过敏原β-乳球蛋白质的检测。根据Gen Bank登录的牛β-乳球蛋白质的DNA序列设计,合成一对特异性引物和探针。将扩增产物连接到p MD19-T载体上,制备质粒标准品并测序鉴定,10倍梯度稀释含有β-乳球蛋白质基因的重组质粒,进行实时荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线,检测该方法的特异性、稳定性、灵敏性,同时将建立的方法用于10种市售食品的检测。成功建立了β-乳球蛋白质的实时荧光定量PCR检测方法,标准曲线的Ct值与模板浓度在3.18×103~3.18×107copies范围内线性关系良好,R2值为0.997 8;检测灵敏度高（318 copies/μL）;特异性强,对羊奶、豆浆DNA均无扩增反应;稳定性好,组内、组间的变异系数均在5%以内。对10种食品牛奶过敏原的检测结果与标签相符。表明所建立的实时荧光定量PCR方法可应用于食品中牛奶过敏原β-乳球蛋白质的检测并可推广到其它过敏原的检测。 展开更多

关键词 牛奶过敏原质 β-乳球蛋白质 Taqman实时荧光定量pcr法 检测

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PCR荧光探针法检测4种生殖道病原体的结果分析 被引量：8

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作者 刘意 冯霞 +4 位作者 李宇 魏虹娟 张立丽 何盼 娄金丽 《临床检验杂志》 CAS 2022年第2期126-128,共3页

目的探讨PCR荧光探针法、培养法、胶体金法和酶联法检测淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体及单纯性疱疹病毒-2型的阳性检出率,评价不同检测方法检测4种生殖道病原体的结果差异和应用价值。方法收集北京佑安医院性病门诊就诊者生殖道... 目的探讨PCR荧光探针法、培养法、胶体金法和酶联法检测淋病奈瑟菌、解脲脲原体、沙眼衣原体及单纯性疱疹病毒-2型的阳性检出率,评价不同检测方法检测4种生殖道病原体的结果差异和应用价值。方法收集北京佑安医院性病门诊就诊者生殖道分泌物1738例、血液标本227例,采用PCR荧光探针法进行解脲脲原体、淋球菌、沙眼衣原体、单纯性疱疹病毒-2型检测,并同时采用培养法检测解脲脲原体、淋球菌;胶体金法检测沙眼衣原体;ELISA法检测单纯性疱疹病毒-2抗体,对PCR荧光探针法及其他3种方法检测结果进行分析。结果478例PCR荧光探针法和培养法同时检测解脲脲原体中,PCR荧光探针法检测阳性率[38.7%(185/478)]略低于培养法检测阳性率[39.96%(191/478)],差异无统计学意义(P>0.05);654例PCR荧光探针法和胶体金法同时检测沙眼衣原体中,PCR荧光探针法检测阳性率[7.34%(48/654)]高于胶体金法检测阳性率[3.21%(21/654)],差异有统计学意义(P<0.001);379例PCR荧光探针法和培养法同时检测淋球菌中,PCR荧光探针法检测阳性率[9.50%(36/379)]略高于培养法检测阳性率[7.65%(29/379)],差异无统计学意义(P>0.05);227例PCR荧光探针法和ELISA法同时检测单纯性疱疹病毒-2型中,PCR荧光探针法检测阳性率[3.52%(8/227)]低于ELISA法检测阳性率[10.57%(24/227)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论PCR荧光探针法可提高衣原体、淋球菌检出率,可用于解脲脲原体特异性检测和单纯性疱疹病毒-2型现症感染检测。 展开更多

关键词 解脲脲原体 pcr荧光探针法 淋球菌 生殖道病原体

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荧光定量PCR法检测儿童肺炎支原体感染的分析 被引量：1

15

作者 马勇 丁国英 《中国实用医药》 2008年第22期77-78,共2页

目的探讨呼吸道感染患儿肺炎支原体的感染情况。方法荧光定量PCR法。结果肺炎支原体的总检出率为29.1%,30d^1岁组,1~3岁组、>3岁组的患儿肺炎支原体感染率明显高于<30d组,差异有统计学意义。四季差异无统计学意义。男女阳性率比... 目的探讨呼吸道感染患儿肺炎支原体的感染情况。方法荧光定量PCR法。结果肺炎支原体的总检出率为29.1%,30d^1岁组,1~3岁组、>3岁组的患儿肺炎支原体感染率明显高于<30d组,差异有统计学意义。四季差异无统计学意义。男女阳性率比较差异无统计学意义。血液和痰标本阳性率比较差异有统计学意义。结论肺炎支原体感染随着年龄增长感染率逐步升高。痰标本检出的阳性率明显高于血液标本。 展开更多

关键词 肺炎支原体 呼吸道感染 荧光定量pcr法

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荧光定量PCR法检测肺炎支原体感染的效果分析

16

作者 谢春福 《中国卫生产业》 2011年第12X期91-91,共1页

目的探讨荧光定量PCR检测小儿肺炎支原体感染的效果,为选择检测方法提供理论与实践参考。方法选择2009年10月至2011年3月我院儿科呼吸门诊300例下呼吸系统感染者,采集咽后壁组织进行PCR检测,同时采集静脉血进行明胶微量颗粒凝集法抗体... 目的探讨荧光定量PCR检测小儿肺炎支原体感染的效果,为选择检测方法提供理论与实践参考。方法选择2009年10月至2011年3月我院儿科呼吸门诊300例下呼吸系统感染者,采集咽后壁组织进行PCR检测,同时采集静脉血进行明胶微量颗粒凝集法抗体测定。结果荧光定量PCR检测的特异性明显好于明胶微量颗粒凝集法(p<0.05)。结论荧光定量PCR对于肺炎支原体感染颗粒凝集法有更高的诊断价值,值得推广应用。 展开更多

关键词 荧光定量pcr法 肺炎支原体感染 颗粒凝集法

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荧光定量PCR方法检测杀菌型乳酸菌产品中的耐药基因 被引量：2

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作者 顾晨荣 俞漪 +1 位作者 张娜娜 徐琼 《食品安全质量检测学报》 CAS 2020年第17期5927-5932,共6页

目的利用荧光定量PCR方法快速检测杀菌型乳酸菌产品中的耐药基因,并快速筛选此类产品中多种益生菌菌株耐药性。方法以杀菌型乳酸菌产品及9种耐药基因为研究对象,将样品中DNA进行提取及纯化后,利用荧光定量PCR方法,进行耐药基因检测。结... 目的利用荧光定量PCR方法快速检测杀菌型乳酸菌产品中的耐药基因,并快速筛选此类产品中多种益生菌菌株耐药性。方法以杀菌型乳酸菌产品及9种耐药基因为研究对象,将样品中DNA进行提取及纯化后,利用荧光定量PCR方法,进行耐药基因检测。结果共测试14种样品,其中12种产品检测出6种不同耐药基因,检出率达85.7%,四环素耐药基因tet(K)及万古霉素耐药基因van(X)的检出率较高;有9种产品携带2种或2种以上耐药基因。结论基于荧光定量PCR方法可以实现快速的对杀菌型乳酸菌产品中多种菌株耐药性的筛选。 展开更多

关键词 杀菌型乳酸菌产品 荧光定量pcr法 耐药基因

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猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：4

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作者 王伟 邹月红 +6 位作者 李雪松 陈欣 郎越坤 田华斌 符芳 李曦 李集临 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期104-107,共4页

为了能快速、准确地诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)石门系强毒,根据登录在GenBank上23株Shimen毒株的全基因组序列,利用DNASIS软件进行序列分析,设计1对特异的荧光定量引物。建立猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法... 为了能快速、准确地诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)石门系强毒,根据登录在GenBank上23株Shimen毒株的全基因组序列,利用DNASIS软件进行序列分析,设计1对特异的荧光定量引物。建立猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法。试验结果表明,本方法最低可检测到的Shimen病毒cDNA含量为100拷贝/μL,敏感度至少是普通PCR的100倍;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、牛流行腹泻病毒Ⅰ型(BVDV-1)和猪瘟病毒C株均无特异性扩增,证明本方法具有很强的特异性;通过批内和批间重复试验,其变异系数<0.7%,结果显示本方法具有很好的重复性。本研究建立了猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法,为猪瘟的预防与控制提供了有效的技术手段,并为猪瘟强毒试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 Shimen毒株 SYBRGreen-Ⅰ染料法实时荧光定量pcr

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毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法在ALRTI患儿咽拭子标本病原体诊断中的应用对比观察 被引量：3

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作者 周雪原 庞晓燕 +3 位作者 米智慧 门晶晶 冀小平 王晓华 《山东医药》 CAS 2023年第12期76-78,共3页

目的毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法在急性下呼吸道感染患儿咽拭子标本病原体诊断中的应用。方法急性呼吸道感染患儿65例(65份咽拭子标本),分别采用毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法检测患儿咽拭子病原体,比较两种方法病原体... 目的毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法在急性下呼吸道感染患儿咽拭子标本病原体诊断中的应用。方法急性呼吸道感染患儿65例(65份咽拭子标本),分别采用毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法检测患儿咽拭子病原体,比较两种方法病原体检出率,并分析两种检测方法与金标准(Sanger测序法)检测结果的一致性。结果毛细管电泳片段分析法病原体检出率为52.3%(呼吸道合胞病毒21份、副流感病毒4份、衣原体病毒2份、腺病毒2份、鼻病毒2份、偏肺病毒3份、博卡病毒1份,其中1份为合胞病毒与鼻病毒混合感染),荧光定量PCR法病原体检出率为45.0%(呼吸道合胞病毒20份、副流感病毒3份、衣原体病毒2份、腺病毒1份、鼻病毒1份),两种方法病原体检出率比较,P>0.05。毛细管电泳片段分析法与Sanger测序法检测结果阳性一致率为100.0%,阴性一致率为100.0%,准确率为100.0%;荧光定量PCR法与Sanger测序法检测结果阳性一致率为86.2%,阴性一致率为93.5%,准确率为90.0%。结论毛细管电泳片段分析法与荧光定量PCR方法病原体检出率无差异,但毛细管电泳片段分析法能检测出病原菌混合感染,且与Sanger测序法检测结果有高度一致性,有更高的临床应用价值。 展开更多

关键词 病原体检测方法 毛细管电泳片段分析法 荧光定量pcr法 病原体 呼吸道感染 急性下呼吸道感染

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蛋白粉中转基因成分实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：2

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作者 王洪健 许银叶 曾伟婷 《食品与发酵科技》 CAS 2018年第1期123-126,共4页

建立了应用实时荧光定量PCR技术检测蛋白粉中转基因成分的方法。通过提取DNA,优化时荧光定量PCR反应体系条件,建立了一种简便快速的检测蛋白粉中转基因成分的方法,具有良好特异性和灵敏度,检出限为0.05%。该方法检测条件稳定,样品前处... 建立了应用实时荧光定量PCR技术检测蛋白粉中转基因成分的方法。通过提取DNA,优化时荧光定量PCR反应体系条件,建立了一种简便快速的检测蛋白粉中转基因成分的方法,具有良好特异性和灵敏度,检出限为0.05%。该方法检测条件稳定,样品前处理简单,是一种快速简便、可靠的方法,适合于推广使用。 展开更多

关键词 实施荧光定量pcr法 蛋白粉 转基因

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