目的探索肺纤维化发病过程中组蛋白3、组蛋白4乙酰化的变化。方法博来霉素气管给药诱导C57BL/6J雄性小鼠发生肺纤维化(博来霉素组),另外设立盐水组和正常对照组,每组16只小鼠。取肺组织进行病理学评分评价肺泡炎和肺纤维化。给药后第7,1...目的探索肺纤维化发病过程中组蛋白3、组蛋白4乙酰化的变化。方法博来霉素气管给药诱导C57BL/6J雄性小鼠发生肺纤维化(博来霉素组),另外设立盐水组和正常对照组,每组16只小鼠。取肺组织进行病理学评分评价肺泡炎和肺纤维化。给药后第7,14,21天用Western blot法检测组织细胞组蛋白3、组蛋白4乙酰化水平。结果给药后第7天和第14天博来霉素组组蛋白3乙酰化率显著低于盐水组(0.855±0.183 vs 1.037±0.142,P=0.041;0.797±0.224 vs 1.186±0.160,P=0.000),而在第21天两组无显著差异(0.927±0.159 vs 0.951±0.103,P=0.832)。给药后第7天和第14天博来霉素组组蛋白4乙酰化率显著低于盐水组(0.976±0.091 vs 1.094±0.121,P=0.006;0.932±0.026 vs 1.017±0.060,P=0.045),而在第21天两组无显著差异(1.002±0.044 vs 0.980±0.068,P=0.662)。组蛋白3乙酰化率与肺泡炎评分呈负相关(r=-0.458,P=0.002)。组蛋白4乙酰化率与肺泡炎(r=-0.495,P=0.001)、肺纤维化(r=-0.396,P=0.010)病理评分均呈负相关。结论组蛋白4乙酰化水平在肺纤维化时下降,可能广泛参与肺泡炎、肺纤维化过程。展开更多
晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)是免疫球蛋白受体,能够与多种配体结合,研究发现RAGE参与了非专职吞噬细胞对组蛋白修饰的微米颗粒的吞噬过程,但目前没有研究证明组蛋白是RAGE的配体。该研...晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)是免疫球蛋白受体,能够与多种配体结合,研究发现RAGE参与了非专职吞噬细胞对组蛋白修饰的微米颗粒的吞噬过程,但目前没有研究证明组蛋白是RAGE的配体。该研究对组蛋白分子能否直接激活RAGE及其下游信号通路进行探究。使用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测哺乳动物细胞对可溶性组蛋白分子的内化;采用钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶染色法检测细胞活性;通过荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯检测胞内活性氧水平;利用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定炎症因子的释放。结果表明,组蛋白分子能够被野生型HEK293T细胞内化并于胞内溶酶体中聚集,RAGE-敲除细胞则无法内化组蛋白;培养基组蛋白质量浓度在100μg/mL时对细胞无明显毒性,细胞活性正常;组蛋白能够通过RAGE刺激细胞活性氧水平升高,并释放炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6);组蛋白与DNA结合能够增强对RAGE的刺激。以上结果表明,组蛋白能够激活RAGE及其下游炎症通路。展开更多
文摘目的探索肺纤维化发病过程中组蛋白3、组蛋白4乙酰化的变化。方法博来霉素气管给药诱导C57BL/6J雄性小鼠发生肺纤维化(博来霉素组),另外设立盐水组和正常对照组,每组16只小鼠。取肺组织进行病理学评分评价肺泡炎和肺纤维化。给药后第7,14,21天用Western blot法检测组织细胞组蛋白3、组蛋白4乙酰化水平。结果给药后第7天和第14天博来霉素组组蛋白3乙酰化率显著低于盐水组(0.855±0.183 vs 1.037±0.142,P=0.041;0.797±0.224 vs 1.186±0.160,P=0.000),而在第21天两组无显著差异(0.927±0.159 vs 0.951±0.103,P=0.832)。给药后第7天和第14天博来霉素组组蛋白4乙酰化率显著低于盐水组(0.976±0.091 vs 1.094±0.121,P=0.006;0.932±0.026 vs 1.017±0.060,P=0.045),而在第21天两组无显著差异(1.002±0.044 vs 0.980±0.068,P=0.662)。组蛋白3乙酰化率与肺泡炎评分呈负相关(r=-0.458,P=0.002)。组蛋白4乙酰化率与肺泡炎(r=-0.495,P=0.001)、肺纤维化(r=-0.396,P=0.010)病理评分均呈负相关。结论组蛋白4乙酰化水平在肺纤维化时下降,可能广泛参与肺泡炎、肺纤维化过程。
文摘晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)是免疫球蛋白受体,能够与多种配体结合,研究发现RAGE参与了非专职吞噬细胞对组蛋白修饰的微米颗粒的吞噬过程,但目前没有研究证明组蛋白是RAGE的配体。该研究对组蛋白分子能否直接激活RAGE及其下游信号通路进行探究。使用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测哺乳动物细胞对可溶性组蛋白分子的内化;采用钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶染色法检测细胞活性;通过荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯检测胞内活性氧水平;利用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定炎症因子的释放。结果表明,组蛋白分子能够被野生型HEK293T细胞内化并于胞内溶酶体中聚集,RAGE-敲除细胞则无法内化组蛋白;培养基组蛋白质量浓度在100μg/mL时对细胞无明显毒性,细胞活性正常;组蛋白能够通过RAGE刺激细胞活性氧水平升高,并释放炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6);组蛋白与DNA结合能够增强对RAGE的刺激。以上结果表明,组蛋白能够激活RAGE及其下游炎症通路。
