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葡萄UDP-糖基转移酶家族的全基因组表征、进化和表达分析
1
作者 王媛媛 刘云清 +5 位作者 徐晶宇 刘云婷 胡禧熙 张超 姜泽宇 朱磊 《食品科学》 北大核心 2025年第14期134-146,共13页
为了全面掌握葡萄糖基转移酶(VvUGT)家族基因的基本信息,筛选调控山葡萄花色苷生物合成的候选UGT基因,本研究通过VvUGT的全基因组鉴定、理化性质测定、系统进化、染色体定位、基因结构与基序表征对VvUGT家族进行生物信息学分析,基于GEO... 为了全面掌握葡萄糖基转移酶(VvUGT)家族基因的基本信息,筛选调控山葡萄花色苷生物合成的候选UGT基因,本研究通过VvUGT的全基因组鉴定、理化性质测定、系统进化、染色体定位、基因结构与基序表征对VvUGT家族进行生物信息学分析,基于GEO数据库芯片平台(GSE36128)进行VvUGT的表达分析,选择不同遗传背景的3个葡萄品种(‘左山一’‘左红一’和‘赤霞珠’)果皮作为实验材料,通过对果实转色过程中花色苷和VvUGT表达的分析,初步筛选参与山葡萄花色苷积累的VvUGT。结果表明,葡萄UGT家族有230个成员,分为16个组(A~P组),蛋白成员主要分布在叶绿体、细胞核和细胞质中,其基因分布在除chr10外的18条染色体上,该家族基因的内含子个数在1~6之间,所有基因均含有PSPG结构;组织表达分析表明VvUGT在欧亚种葡萄‘Corvina’中的表达具有组织特异性和时空特异性;花色苷分析结果表明3个品种葡萄果皮花色苷的含量和糖基化成分组成差异明显,转录组分析表明在果皮转色过程中呈现高表达水平的85个VvUGT基因表达模式在葡萄品种和生长时期上均表现出显著差异,通过相关性分析筛选出Vitvi15g01073.t01、Vitvi15g01643.t01和Vitvi17g00753.t01(5GT)可能在山葡萄花色苷生物合成中发挥作用。本研究提供了VvUGT基因家族的完整信息,筛选出可能参与山葡萄花色苷生物合成的UGT基因,揭示了其在葡萄皮糖基化中的潜在作用,可为进一步研究候选基因在山葡萄花色苷合成中的功能提供理论依据,为山葡萄品种改良及提升山葡萄酒色泽稳定性奠定基础。 展开更多
关键词 葡萄 尿苷二磷酸糖基转移酶 基因家族 生物信息学分析 表达分析
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改性Fe_(3)O_(4)一步纯化固定糖基转移酶合成人参皂苷Rh2
2
作者 刘啸尘 岳骏松 +4 位作者 武占省 李志燕 涂旻 石怀琪 范代娣 《西安工程大学学报》 2025年第1期1-8,共8页
游离酶的纯化成本高及其难以重复利用的弊端制约了其在绿色生化工业的应用,而具有良好性能的固定化酶是其工业化的必要条件。为降低糖基转移酶在催化合成人参皂苷Rh2过程中分离纯化的成本及克服游离酶不能重复利用的难题,合成了一种具... 游离酶的纯化成本高及其难以重复利用的弊端制约了其在绿色生化工业的应用,而具有良好性能的固定化酶是其工业化的必要条件。为降低糖基转移酶在催化合成人参皂苷Rh2过程中分离纯化的成本及克服游离酶不能重复利用的难题,合成了一种具磁性的Fe_(3)O_(4)/MPN-Ni^(2+)材料,其可在固定重组糖基转移酶(UGT)的同时完成纯化,所得固定化酶可从反应中快速分离以重复使用。经验证,固定化材料对UGT有特异性吸附作用,且固定化酶(Fe_(3)O_(4)/MPN-Ni^(2+)@UGT)具有高的载酶量(100.91 mg/g)和稳定性,6个循环后仍保持了65.07%的活性。储存21 d后,活性仍有54.01%。最适条件下,固定化酶可催化合成40.73μg/mL的Rh2,且底物人参二醇(PPD)的转化率为70.88%。这种低成本、高效、稳定的材料在酶纯化和合成人参皂苷方面具有巨大的工业应用潜力和价值。 展开更多
关键词 酶固定化 糖基转移酶 磁性纳米粒子 His标签 人参皂苷RH2
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红花钓钟柳中新型糖基转移酶的筛选与鉴定
3
作者 吴亚男 杨一涵 +2 位作者 杜丽平 庄以彬 刘涛 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期17-23,共7页
苯乙醇苷类化合物因具有抗氧化、抗肿瘤等生理活性在食品、医药等领域备受关注。糖基转移酶作为生物催化剂可用于各种糖苷产物的制备。为丰富苯乙醇苷类化合物的糖苷多样性,在红花钓钟柳转录组中筛选糖基转移酶候选基因并进行功能鉴定... 苯乙醇苷类化合物因具有抗氧化、抗肿瘤等生理活性在食品、医药等领域备受关注。糖基转移酶作为生物催化剂可用于各种糖苷产物的制备。为丰富苯乙醇苷类化合物的糖苷多样性,在红花钓钟柳转录组中筛选糖基转移酶候选基因并进行功能鉴定。该研究基于不同植物组织中基因差异表达分析筛选到7条候选基因,将其克隆到pET-MBP表达载体上,并导入大肠杆菌Escherichia.coli Transetta(DE3)异源表达后利用体外酶促反应进行其生物催化活性研究。获得一个新型糖基转移酶UGT712A2,可以催化桂叶苷B C4-OH的葡萄糖基化反应生成新的苯乙醇苷类化合物桂叶苷B-4-葡萄糖苷。同时,UGT712A2也可以催化毛蕊花糖苷、芦丁、胡黄连苷Ⅱ、7-去甲基软木花椒素等化合物的糖基化,具有一定的底物宽泛性。因此,UGT712A2可能是一种潜在的酶工具,用于苯乙醇苷类化合物和其他多种新型糖苷产物的制备,从而发现新的糖苷化合物应用于食品、医药领域。 展开更多
关键词 苯乙醇苷类化合物 糖基转移酶 生物催化剂 糖苷产物 红花钓钟柳 底物宽泛性
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灯盏花3-O-葡萄糖基转移酶基因的克隆、表达及生物信息分析
4
作者 莫维淼 王梦钦 +3 位作者 徐达 何凤明 陈晓波 张云峰 《南方农业》 2024年第13期1-6,共6页
从灯盏花cDNA中克隆出灯盏花3-O-葡萄糖基转移酶基因(EbUF3GT)并对其序列进行生物信息学分析以预测其功能。根据课题组前期的转录组分析数据,筛选出了灯盏花EbUF3GT基因的部分序列,并利用RACE基因克隆方法,获得灯盏花EbUF3GT基因的全长c... 从灯盏花cDNA中克隆出灯盏花3-O-葡萄糖基转移酶基因(EbUF3GT)并对其序列进行生物信息学分析以预测其功能。根据课题组前期的转录组分析数据,筛选出了灯盏花EbUF3GT基因的部分序列,并利用RACE基因克隆方法,获得灯盏花EbUF3GT基因的全长cDNA,运用生物信息学分析该基因的相似性和同源性、编码蛋白的理化性质,并通过荧光定量PCR检测基因在植物不同部位中的表达情况。结果发现,克隆cDNA的ORF长1 395 bp,编码464个氨基酸,其蛋白分子量51 850.48,理论等电点为5.48。EbUF3GT蛋白由24.78%的α-螺旋(Alpha helix)、22.20%的延伸(Extendedstand)、53.02%的随机卷曲(Random coil)组成,属于GT家族中的B类型且包含PSPG盒的保守序列。灯盏花的EbUF3GT基因与青蒿、艾草亲缘关系较近,属同一个分支,它们的UF3GT具有共同起源。EbUF3GT基因在根、茎、叶、花这几个部位都能表达,尤其在花中的表达量最高,干旱胁迫也会增加它的表达。结论:通过对EbUF3GT研究,为进一步探索EbUF3GT基因在灯盏花类黄酮次生代谢产物合成和调控机制提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 灯盏花 糖基转移酶 黄酮 基因克隆 生物信息学
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三叶青转录组测序及其糖基转移酶的分析
5
作者 林婧 洪玉燕 +3 位作者 周罗静 徐惠龙 黄泽豪 范世明 《北方药学》 2024年第12期5-10,共6页
目的:采用高通量转录组测序技术,对三叶青进行转录组测序,并对其序列进行功能注释,从中找出与黄酮苷类代谢相关的糖基转移酶,为三叶青的分子育种、糖基转移酶资源开发等研究提供参考。方法:利用Illumina HiSeq 4000测序仪对三叶青的转... 目的:采用高通量转录组测序技术,对三叶青进行转录组测序,并对其序列进行功能注释,从中找出与黄酮苷类代谢相关的糖基转移酶,为三叶青的分子育种、糖基转移酶资源开发等研究提供参考。方法:利用Illumina HiSeq 4000测序仪对三叶青的转录组进行分析。利用Trinity组装软件进行三叶青转录组De novo组装。利用Blast 2 GO软件将基因序列与功能数据库,包括Nr数据库、GO数据库、KOG数据库、Swiss-Prot数据库、KEGG数据库进行对比,获得其注释分析信息,分析糖基转移酶基因的序列特征。结果:三叶青样品测序后进行基因组装,共得到229003条序列,所得序列最长长度为17232 bp,最小长度为201 bp,平均长度为536 bp,碱基的数量总和占总的碱基数量的41.82%,N 50为769 bp。经过注释,有注释信息的Unigene得到了125101个,被注释到的Unigene最多数量的数据库是Nr数据库,有123549条,其次是GO数据库。与黄酮代谢相关通路有4条,共760有个基因与黄酮合成相关,其中注释到的糖基转移酶,分别是藏花酸葡萄糖基转移酶、花青素3-O-糖苷5-O-葡萄糖基转移酶、松柏醇乙醇葡糖基转移酶。结论:本文对三叶青进行高通量转录组测序,并对其序列进行功能注释,并挖掘出其中三种黄酮苷相关的糖基转移酶,为三叶青的分子育种、糖基转移酶资源的合理开发及利用提供参考价值。 展开更多
关键词 三叶青 转录组测序 黄酮生物合成 糖基转移酶
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番茄源糖基转移酶UGTSL2的重组表达及其诱导条件优化
6
作者 詹依雅 夏菠 《食品安全导刊》 2024年第36期124-129,133,共7页
来自甜叶菊叶片的莱鲍迪苷D因其高甜度、低热量被认为是理想的天然甜味剂,又因其产量少、相关合成酶可溶性表达水平低而限制其应用。糖基转移酶SL2能将天然产量高但苦味重的莱鲍迪苷A转化为天然产量低但苦味少的莱鲍迪苷D。本研究克隆... 来自甜叶菊叶片的莱鲍迪苷D因其高甜度、低热量被认为是理想的天然甜味剂,又因其产量少、相关合成酶可溶性表达水平低而限制其应用。糖基转移酶SL2能将天然产量高但苦味重的莱鲍迪苷A转化为天然产量低但苦味少的莱鲍迪苷D。本研究克隆番茄来源莱鲍迪苷D相关合成酶UGTSL2基因,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达,并通过单因素试验探究提高可溶性重组酶的表达水平。结果表明,重组酶在诱导温度为16 ℃、IPTG浓度为0.05 mmol·L^(-1)、诱导时间为28 h时,在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性表达量最大。利用高效液相色谱法对反应体系进行分析,表明重组酶能够将莱鲍迪苷A成功转化为应用价值更高的莱鲍迪苷D。研究结果为后续可溶性重组酶固定化应用合成莱鲍迪苷D奠定良好基础,也为合成价值更高的莱鲍迪苷M提供前提支持。 展开更多
关键词 糖基转移酶 异源表达 生物转化 莱鲍迪苷D 莱鲍迪苷A
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半理性设计提升4-α-糖基转移酶歧化活性并应用于工业生产
7
作者 谢静雯 李超慧 +2 位作者 韦猛 赵伟 张金祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第23期45-52,共8页
4-α-糖基转移酶(4-alpha-glucanotransferase,4αGT)是一种多功能的糖基转移酶,在淀粉工业上具有广泛的应用,如淀粉改性及海藻糖、麦芽寡糖、大环糊精、糖原等淀粉深加工产品的制备。其中,以淀粉为原料制备海藻糖的工业生产过程中,借助... 4-α-糖基转移酶(4-alpha-glucanotransferase,4αGT)是一种多功能的糖基转移酶,在淀粉工业上具有广泛的应用,如淀粉改性及海藻糖、麦芽寡糖、大环糊精、糖原等淀粉深加工产品的制备。其中,以淀粉为原料制备海藻糖的工业生产过程中,借助4αGT的歧化活性,能够减少葡萄糖、麦芽糖等副产物的含量,从而提升海藻糖产量。在该研究中,采用半理性设计策略对Synechocystis sp.PCC 6803来源4αGT进行了改造。研究基于HotSpot Wizard在线工具及残基所处空间位置选择突变热点,利用4-α-糖基转移酶水解淀粉产生透明圈的能力对18000个转化子进行高通量筛选,确定了一个对4αGT酶活性起着关键性作用的位点,对其进行饱和突变,最终获得活性提升的突变体A470F,歧化活性较野生型提升了17%。在工业化生产的条件下,突变体A470F在海藻糖制备上,较野生型也有所提升。通过对突变位点附近底物通道及作用力进行分析,为4αGT的活性改造提供了理论支持,并且为淀粉糖工业的制造效率提升提供了新思路。 展开更多
关键词 海藻糖 4-α-糖基转移酶 半理性设计 歧化活性
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2型猪链球菌鼠李糖基转移酶Cps2F生物信息学分析及重组蛋白制备
8
作者 林苗 陆冰冰 +4 位作者 汪雨荷 唐成亮 郑峰 潘秀珍 倪华 《医学研究与战创伤救治》 北大核心 2024年第12期1283-1291,共9页
目的对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)鼠李糖基转移酶Cps2F蛋白进行生物信息学分析,并利用原核表达技术纯化制备重组Cps2F蛋白,鉴定鼠李糖基转移酶活性,为进一步探究其生物学功能奠定基础。方法采用DNAstar、NCB... 目的对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)鼠李糖基转移酶Cps2F蛋白进行生物信息学分析,并利用原核表达技术纯化制备重组Cps2F蛋白,鉴定鼠李糖基转移酶活性,为进一步探究其生物学功能奠定基础。方法采用DNAstar、NCBI等生物信息学软件与数据库,系统分析Cps2F蛋白的理化性质、蛋白结构域、三维结构及相互作用网络等生物学基本特征。以S.suis 205ZYH33菌株为模板,PCR扩增cps2F基因,构建Cps2F蛋白重组表达质粒,将重组质粒转入E.coli BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,并用透析法复性,获得可溶性的重组Cps2F蛋白,考马斯亮蓝染色和蛋白免疫印迹对Cps2F蛋白的纯度进行鉴定。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行酶活性检测。结果在线网站预测分析表明,Cps2F蛋白由389个氨基酸残基组成,属亲水性稳定蛋白,理论相对分子质量为45000,等电点pI为8.52,基因功能注释为鼠李糖基转移酶。Cps2F蛋白二级结构以α-螺旋与无规则卷曲为主,三级结构与3c4q.1.A蛋白模型相似,能够与多种荚膜合成蛋白相互作用。双酶切结果显示,成功构建pET32a::cps2F重组质粒,并获得E.coli BL21 Cps2F重组蛋白表达菌株。SDS-PAGE电泳结果显示,Cps2F蛋白主要以包涵体形式表达,理论分子质量与预期大小相符;使用透析法成功将Cps2F包涵体蛋白复性,蛋白免疫印迹检测表明,Cps2F蛋白条带单一,纯度较高,可用于后续进一步研究。对纯化的复性Cps2F蛋白的鼠李糖基转移酶酶活力检测,其酶活力为(69.95±1.70)U/L。结论经透析复性后纯化的重组Cps2F蛋白具备鼠李糖基转移酶酶活性,为猪链球菌荚膜合成调控机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 荚膜多糖 糖基转移酶 原核表达 蛋白纯化
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植物UDP-糖基转移酶生化特性和功能研究进展 被引量：28
9
作者 姬向楠 何非 +1 位作者 段长青 王军 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期316-323,共8页
UDP-糖基转移酶催化糖基转移反应,将糖基从活化的供体分子转移到受体分子上,从而调节受体分子在细胞和机体内的活性,如生物活性、溶解性和转运性。糖苷化是植物次生代谢较为普遍的修饰反应,在调节植物体内激素平衡、解除外源毒素毒性以... UDP-糖基转移酶催化糖基转移反应,将糖基从活化的供体分子转移到受体分子上,从而调节受体分子在细胞和机体内的活性,如生物活性、溶解性和转运性。糖苷化是植物次生代谢较为普遍的修饰反应,在调节植物体内激素平衡、解除外源毒素毒性以及次生代谢产物的合成和贮存等方面发挥重要功能。本文就与植物次生代谢产物、植物激素及生物异源物质糖苷化相关的UDP-糖基转移酶的生化特性和功能研究进展进行综述,以期为本领域相关研究提供一定的参考。 展开更多
关键词 植物次生代谢 UDP-糖基转移酶 生化及分子生物学
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环糊精糖基转移酶高产菌株的快速筛选 被引量：18
10
作者 曹新志 金征宇 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期53-55,共3页
以酚酞作指示剂 ,在琼脂固态培养基上 ,根据酚酞变为无色所形成变色圈大小筛选环糊精糖基转移酶高产突变株是一种平板快速筛选方法。嗜碱芽孢杆菌 1177菌株经紫外线和γ射线诱变处理后 .经该法筛选得到突变株圈 7- 12 ,该菌株产环糊精... 以酚酞作指示剂 ,在琼脂固态培养基上 ,根据酚酞变为无色所形成变色圈大小筛选环糊精糖基转移酶高产突变株是一种平板快速筛选方法。嗜碱芽孢杆菌 1177菌株经紫外线和γ射线诱变处理后 .经该法筛选得到突变株圈 7- 12 ,该菌株产环糊精糖基转移酶达 5 6 0 0u/ml,较出发菌株提高 183%。连续 5代传代试验表明 ,突变株 7- 展开更多
关键词 环糊精糖基转移酶 生产菌株 平板快速筛选方法 酚酞 嗜碱芽孢杆菌 诱变 淀粉
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β-环状糊精葡萄糖基转移酶菌株的双重诱变育种 被引量：6
11
作者 何飞燕 廖威 +1 位作者 莫于旺 林华 《中国酿造》 CAS 北大核心 2010年第4期154-157,共4页
建立以酚酞作指示剂,在琼脂固态培养基上筛选环糊精糖基转移酶高产突变株的平板快速筛选法,从土壤分离物中筛选到1株葡萄糖基转移酶(CGTase)产生菌gxmf1,于37℃、250r/min摇床发酵3d,产酶1524U/mL。该菌株经紫外线和LiCl诱变处理后,筛... 建立以酚酞作指示剂,在琼脂固态培养基上筛选环糊精糖基转移酶高产突变株的平板快速筛选法,从土壤分离物中筛选到1株葡萄糖基转移酶(CGTase)产生菌gxmf1,于37℃、250r/min摇床发酵3d,产酶1524U/mL。该菌株经紫外线和LiCl诱变处理后,筛选得到突变株B15,产环糊精糖基转移酶达5416U/mL,较出发菌株提高255%。连续5代传代试验表明突变株B15产酶基本稳定。 展开更多
关键词 育种 环糊精糖基转移酶 双重诱变
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嗜碱芽孢杆菌产环糊精葡萄糖基转移酶发酵条件的优化 被引量：16
12
作者 曹新志 金征宇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期122-126,共5页
对一株嗜碱芽孢杆菌产环糊精糖基转移酶的发酵条件进行了研究。利用单因素试验和正交试验获得该菌株产环糊精糖基转移酶的最佳条件为:接种量3%;培养温度30℃;pH10.5;发酵培养基的组成为玉米粉2%,酵母膏1.5%,玉米浆5%;250ml三角瓶装液量... 对一株嗜碱芽孢杆菌产环糊精糖基转移酶的发酵条件进行了研究。利用单因素试验和正交试验获得该菌株产环糊精糖基转移酶的最佳条件为:接种量3%;培养温度30℃;pH10.5;发酵培养基的组成为玉米粉2%,酵母膏1.5%,玉米浆5%;250ml三角瓶装液量为30ml;270r/min振荡培养3d,其发酵液酶活可达5400U/ml左右。10L罐发酵时酶活可达5820U/ml。 展开更多
关键词 嗜碱芽孢杆菌 环糊精糖基转移酶 发酵条件 优化
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糖苷酶与糖基转移酶工程的研究进展 被引量：3
13
作者 刘婧 陈启和 +2 位作者 章海锋 傅明亮 何国庆 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期386-390,共5页
近年来糖苷酶与糖基转移酶工程在应用于合成和降解多糖结构领域取得了显著进展,其重要发展有通过完全饱和突变改进木聚糖酶耐热性,从一种倒置糖苷酶中首次衍生化获得糖苷合成酶,以及出现一类新的经过改良的能够有效连接硫代糖苷用以合... 近年来糖苷酶与糖基转移酶工程在应用于合成和降解多糖结构领域取得了显著进展,其重要发展有通过完全饱和突变改进木聚糖酶耐热性,从一种倒置糖苷酶中首次衍生化获得糖苷合成酶,以及出现一类新的经过改良的能够有效连接硫代糖苷用以合成多糖的糖苷酶;特别是通过随机突变和定向改造方法改进糖苷酶活性的应用增加。虽然糖基转移酶工程研究还处于起始阶段,但是目前基于在结构基础上改变酶底物特异性和在整个细胞内控制糖基转移酶的构象以影响体内糖生物学复杂变化的研究很可能预示着该领域将出现重大的改革浪潮。本文主要综述和展望了糖苷酶和糖基转移酶的最新研究进展。 展开更多
关键词 糖苷酶 糖基转移酶 底物特异性 糖工程 分子工程
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甜叶菊糖基转移酶UGT76G1的克隆表达及其性质研究 被引量：5
14
作者 刘欢 李艳 +3 位作者 严明 陈圣 郝宁 许琳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第20期187-190,共4页
目的:利用甜叶菊糖基转移酶UGT76G1特异性催化甜菊糖中含量高并且具有较强后苦味的甜菊甙生成高甜度的莱鲍迪甙A。方法:将合成的UGT76G1编码基因插入pYES2载体的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,成功构建了pYES2-UGT重组质粒。重组质粒导入... 目的:利用甜叶菊糖基转移酶UGT76G1特异性催化甜菊糖中含量高并且具有较强后苦味的甜菊甙生成高甜度的莱鲍迪甙A。方法:将合成的UGT76G1编码基因插入pYES2载体的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,成功构建了pYES2-UGT重组质粒。重组质粒导入表达宿主酿酒酵母YPH499中,利用2%半乳糖对重组菌进行诱导表达。结果:确定了最佳诱导时机为菌体培养后48h,诱导表达时间为12h。并对重组酶粗酶液性质进行了初步研究,确定其最适反应pH为8.0,最适反应温度为40℃,最佳反应时间为36h。结论:为建立经济高效的生物催化法对甜菊糖口味改质奠定了基础。 展开更多
关键词 甜叶菊 莱鲍迪甙A 糖基转移酶UGT76G1
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高山红景天中糖基转移酶家族cDNA全长基因的克隆 被引量：3
15
作者 于寒松 张继星 +2 位作者 李彦舫 马兰青 胡耀辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第21期244-247,共4页
为了获得高山红景天中红景天苷生物合成关键酶——UDP-糖基转移酶家族基因的全长cDNA序列,采用在线简并引物设计软件结合3′-RACE技术获得两个糖基转移酶基因的3′端部分序列,进一步采用不同的5′-RACE试剂盒扩增两个基因的5′端序列,... 为了获得高山红景天中红景天苷生物合成关键酶——UDP-糖基转移酶家族基因的全长cDNA序列,采用在线简并引物设计软件结合3′-RACE技术获得两个糖基转移酶基因的3′端部分序列,进一步采用不同的5′-RACE试剂盒扩增两个基因的5′端序列,结果显示利用Takara公司的试剂盒扩增可以得到cDNA全长序列(GenBank登录号为EF508689和EU567325),而采用Invitrogen公司的试剂盒得到的序列不包括全部开放读码框。实验证明,利用Takara公司的SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit克隆获得基因全长序列的比率更高。 展开更多
关键词 糖基转移酶 基因克隆 cDNA末端快速克隆法(RACE) 高山红景天
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环糊精糖基转移酶的分离纯化及性质 被引量：7
16
作者 曹新志 金征宇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第4期43-46,共4页
一株产环糊精糖基转移酶的嗜碱芽孢杆菌发酵后离心得到的粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAD-Cellulose50离子交换层析、SepharoseCL-6B凝胶层析得到电泳纯的酶,用SDS-PAGE测定酶的分子量为69kD。以马铃薯淀粉为底物时的Km为1.24mg/ml和Vmax114.9... 一株产环糊精糖基转移酶的嗜碱芽孢杆菌发酵后离心得到的粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAD-Cellulose50离子交换层析、SepharoseCL-6B凝胶层析得到电泳纯的酶,用SDS-PAGE测定酶的分子量为69kD。以马铃薯淀粉为底物时的Km为1.24mg/ml和Vmax114.9μg/min,酶反应的最适温度为60℃,最适pH值为5.0,在pH6.0～10.0范围内基本稳定,在70℃以下基本保持稳定。Ag+、Cu2+、Mg2+、Al3+、Co2、Zn2+、Fe2+对酶活有明显的抑制作用,Sn2+、Mn2+对酶活力有一定的抑制作用,其它金属离子对酶活力没有影响。 展开更多
关键词 环糊精糖基转移酶 嗜碱芽孢杆菌 分离 纯化 酶活力
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重叠延伸PCR技术构建β-环糊精葡糖基转移酶基因的定点突变原核表达载体 被引量：2
17
作者 王华 文一 +4 位作者 于寒松 朴春红 王玉华 刘俊梅 胡耀辉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期145-147,151,共4页
采用重叠延伸PCR技术对环糊精葡萄糖基转移酶基因序列中保守区域的二个氨基酸位点Y127,R254进行体外基因定点突变。将突变基因分别亚克隆进pUC-18,经PCR鉴定及序列分析,所转化的Escherichia coli BL21(DE3)中含有插入的突变基因重组质粒... 采用重叠延伸PCR技术对环糊精葡萄糖基转移酶基因序列中保守区域的二个氨基酸位点Y127,R254进行体外基因定点突变。将突变基因分别亚克隆进pUC-18,经PCR鉴定及序列分析,所转化的Escherichia coli BL21(DE3)中含有插入的突变基因重组质粒,结果表明成功构建了Y127F、R254F二个突变基因的重组表达载体。 展开更多
关键词 β-环糊精葡糖糖基转移酶 重叠延伸PCR 定点突变 原核表达载体 构建
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栖热菌4-α-糖基转移酶对玉米淀粉凝胶特性及抗消化性的影响 被引量：2
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作者 李学红 吴宗帅 +1 位作者 陆勇 刘延奇 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第11期19-23,29,共6页
利用栖热菌4-α-糖基转移酶(TSαGT)处理玉米淀粉,通过质构TPA及酶解分析等方法研究该酶对玉米淀粉糊化、凝胶特性和消化性的影响。结果表明,TSαGT可以显著降低玉米淀粉中直链淀粉含量(从30%降低至10%),从而使淀粉糊冻融稳定性提高、... 利用栖热菌4-α-糖基转移酶(TSαGT)处理玉米淀粉,通过质构TPA及酶解分析等方法研究该酶对玉米淀粉糊化、凝胶特性和消化性的影响。结果表明,TSαGT可以显著降低玉米淀粉中直链淀粉含量(从30%降低至10%),从而使淀粉糊冻融稳定性提高、糊透明度改善;在0.03～0.09 U/g酶加量条件下,TSαGT可使玉米凝胶硬度略微降低,而胶着性和咀嚼性提高到原来的1.6倍,黏接性、回复性和弹性也得到小幅提高,同时玉米淀粉的慢消化及抗消化淀粉成分分别提高至原来的1.5和1.9倍。因此,TSαGT可应用于玉米淀粉的优化改性,控制合适的酶处理程度可以显著提高玉米淀粉糊及凝胶的应用特性,同时增加其抗消化性。 展开更多
关键词 玉米淀粉 4-α糖基转移酶 质构特性 消化性
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重组酪醇糖基转移酶表达条件的优化与纯化 被引量：4
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作者 胡耀辉 朱蕾 于寒松 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第17期9002-9004,共3页
[目的]研究利用现代生物技术制备红景天苷的方法。[方法]试验借助SDS-PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件。[结果]最佳诱导表达条件为... [目的]研究利用现代生物技术制备红景天苷的方法。[方法]试验借助SDS-PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件。[结果]最佳诱导表达条件为:诱导时间5 h,IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导温度37℃;用镍柱亲和层析对该含有组氨酸标签的融合蛋白进行纯化,获得了纯度达99%以上的目的蛋白。[结论]该项研究为重组糖基转移酶的纯化提供了成功的经验。 展开更多
关键词 酪醇糖基转移酶 重组蛋白 表达条件优化 纯化
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布鲁菌糖基转移酶对细胞炎症反应的影响 被引量：1
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作者 张豫 张辉 +6 位作者 张艳 孟茹 王震 陈瑞花 张俊波 鲁芝子 陈创夫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1437-1443,共7页
本研究旨在研究布鲁菌糖基转移酶(WboA)在诱发胚胎滋养层细胞(HTP-8)炎症反应中的作用。以羊种布鲁菌M5-90为模板,扩增WboA基因,构建pET28a(+)-WboA重组表达质粒,转化重组质粒在BL21(DE3)中表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定,并对重... 本研究旨在研究布鲁菌糖基转移酶(WboA)在诱发胚胎滋养层细胞(HTP-8)炎症反应中的作用。以羊种布鲁菌M5-90为模板,扩增WboA基因,构建pET28a(+)-WboA重组表达质粒,转化重组质粒在BL21(DE3)中表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定,并对重组WboA蛋白进行纯化。构建自杀载体pGEM-7zf-ΔWboA-SacB,通过同源重组的方法,筛选布鲁菌WboA基因缺失株ΔWboA,并进行PCR鉴定和遗传稳定性检测。然后将纯化的WboA蛋白与ΔWboA分别作用于胚胎滋养层细胞,ELISA检测IL-6、IL-10、TNF-α和乳酸脱氢酶(LDH)的相对变化量。结果成功纯化了WboA蛋白,构建了ΔWboA,ΔWboA侵染胚胎滋养层细胞诱导产生炎症细胞因子IL-6、IL-10和TNF-α均低于M5-90对照组,差异显著(P<0.05),WboA蛋白作用胚胎滋养层细胞时,炎症细胞因子IL-6、TNF-α和LDH均高于PBS对照组,差异极显著(P<0.01)。本研究表明WboA蛋白具有细胞毒作用,布鲁菌的致炎作用与脂多糖O链相关,为进一步阐明布鲁菌感染宿主细胞的发病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁菌 糖基转移酶 炎症细胞因子 LPS
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