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双元细菌人工染色体基因组文库研究进展
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作者 朱丹 张杰伟 +2 位作者 陈亚娟 张少斌 魏建华 《现代农业科技》 2013年第2期29-30,36,共3页
酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)是伴随着人类基因组计划的实施而产生的,这些大片段基因克隆载体的应用推动了分子生物学、遗传学等学科的快速发展。以农杆菌介导的直接转化植物为代表的双元细菌人工染色体(BIBAC)载体的发展... 酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)是伴随着人类基因组计划的实施而产生的,这些大片段基因克隆载体的应用推动了分子生物学、遗传学等学科的快速发展。以农杆菌介导的直接转化植物为代表的双元细菌人工染色体(BIBAC)载体的发展,加速植物基因组的研究,成为植物基因组分析、基因功能鉴定、染色体结构与功能关系研究的重要工具。介绍了人工染色体文库的发展史,根据建库经验,着重阐述了BIBAC文库的构建、鉴定与应用。 展开更多
关键词 人工染色 双元细菌人工染色体文库 基因组文库
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稻瘟病菌细菌人工染色体(BAC)基因组文库的构建 被引量:3
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作者 周晓罡 朱立煌 +3 位作者 翟文学 李进斌 罗朝喜 李成云 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第4期331-334,共4页
稻瘟病菌是一种重要的植物病原菌 ,同时又是研究植物和病原物之间相互关系的一个重要试验系统。实验通过采用 95 - 2 3- 4a稻瘟病菌株经提取纯化得到该稻瘟病菌的细胞核基因组总DNA ,用限制性内切酶部分酶解后 ,与经末端去磷酸化处理过... 稻瘟病菌是一种重要的植物病原菌 ,同时又是研究植物和病原物之间相互关系的一个重要试验系统。实验通过采用 95 - 2 3- 4a稻瘟病菌株经提取纯化得到该稻瘟病菌的细胞核基因组总DNA ,用限制性内切酶部分酶解后 ,与经末端去磷酸化处理过的pCUGIBAC1质粒载体按一定摩尔比例相互连接 ,通过转化E .coliDH10B感受态细胞进而通过蓝白斑筛选挑取白色克隆从而构建了 95 - 2 3- 4a稻瘟病菌株的细菌人工染色体 (BAC)基因组文库。通过进行酶切检测及Southern杂交分析后确定所构建的BAC文库平均插入片段 2 9.1kb ,该文库覆盖 7.4倍基因组 。 展开更多
关键词 稻瘟病菌 细菌 人工染色 BAC 基因组文库
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细菌人工染色体荧光原位杂交技术的应用 被引量:3
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作者 娜日苏 陈献伟 +4 位作者 冯宝刚 雷娜 赵瑞杰 关伟军 马月辉 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第11期95-99,共5页
目前,覆盖人类、植物、畜禽、微生物等100多种物种全基因组的细菌人工染色体文库在不同时间、不同群体中相继产生,为物种基因资源的保存、基因组学和后基因组学的研究提供了可靠的材料。细菌人工染色体与荧光原位杂交技术的结合能够将... 目前,覆盖人类、植物、畜禽、微生物等100多种物种全基因组的细菌人工染色体文库在不同时间、不同群体中相继产生,为物种基因资源的保存、基因组学和后基因组学的研究提供了可靠的材料。细菌人工染色体与荧光原位杂交技术的结合能够将物种的大片段基因组DNA杂交在染色体上,确定基因或标记物在染色体上的物理位置,从而成为细胞和分子生物学领域中必不可少的工具。论文对细菌人工染色体荧光原位杂交技术在染色体结构与核型分析、疾病与肿瘤病原学研究、基因和标记物的定位与细胞遗传图谱绘制、基因组比较作图及物种进化中的应用和发展进行了综述。 展开更多
关键词 细菌 人工染色 荧光原位杂交 应用
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马立克氏病病毒meq基因缺失株细菌人工染色体序列自我敲除的分子鉴定 被引量:3
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作者 孙鹏 苏帅 +2 位作者 李延鹏 丁家波 崔治中 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期285-291,共7页
本试验旨在对缺失meq基因的马立克氏病病毒(MDV)感染性克隆基因组中细菌人工染色体(BAC)序列的自我敲除进行分子鉴定。将含有表达cre重组酶真核表达盒的SC9—1重组质粒通过转染鸡胚成纤维细胞(CEF)拯救SC9—1重组病毒。将SC9—1... 本试验旨在对缺失meq基因的马立克氏病病毒(MDV)感染性克隆基因组中细菌人工染色体(BAC)序列的自我敲除进行分子鉴定。将含有表达cre重组酶真核表达盒的SC9—1重组质粒通过转染鸡胚成纤维细胞(CEF)拯救SC9—1重组病毒。将SC9—1重组病毒在CEF细胞上进行连续传代培养,利用病毒表达的cre重组酶在传代过程中逐步敲除病毒的BAC序列。分别提取1~10代不同代次SC9—1重组病毒的DNA作为模板,利用BAC序列特异性引物对病毒基因组中的BAC进行PCR检测。利用针对BAC序列gpt基因的特异性检测引物,以MDV保守基因pp38作为内参,对不同代次病毒基因组中BAc序列进行荧光定量PCR的检测。利用PCR扩增SC9—1病毒敲除BAC序列后基因组中残留loxp位点两端序列,通过测序分析进一步验证BAC序列的敲除。利用BAC序列特异性引物对不同代次病毒基因组中BAC序列的检测结果显示,1~5代病毒DNA均能扩增出600bp的特异性目的条带,证实病毒的基因组中含有BAC序列。6~10代病毒DNA均不能扩增出特异性目的条带,证实病毒基因组中没有BAC序列。荧光定量PCR结果显示,病毒基因组中的BAC序列随着病毒的传代逐渐减少,直至第6代已经完全检测不到BAC序列。在病毒BAC序列敲除的过程中,对每代病毒BAC序列敲除后残留loxp位点序列进行PCR测序鉴定,结果显示BAC序列敲除后基因组中仅留下一个loxp位点,序列同源性均在99.7%以上。结果表明,利用cre/loxp系统将病毒在CEF细胞上连续6代传代培养可将MDVmeq基因缺失株SC9—1的BAC序列完全敲除掉,且同源重组酶敲除BAC序列具有高度一致性。 展开更多
关键词 马立克氏病 MEQ基因 细菌人工染色 敲除 鉴定
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毛竹大片段双元细菌人工染色体基因组文库的构建 被引量:2
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作者 管雨 杨洋 +2 位作者 张智俊 罗淑萍 汤定钦 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期527-532,共6页
从毛竹Phyllostachys pubescens幼嫩叶片中提取纯化得到高质量的基因组DNA,经限制性内切酶BamH I对它们进行梯度酶切,脉冲场电泳选择合适酶切DNA片段,与脱磷酸化处理过的质粒载体pCLD04541按质量比3∶1相互连接,转化大肠杆菌Escherichia... 从毛竹Phyllostachys pubescens幼嫩叶片中提取纯化得到高质量的基因组DNA,经限制性内切酶BamH I对它们进行梯度酶切,脉冲场电泳选择合适酶切DNA片段,与脱磷酸化处理过的质粒载体pCLD04541按质量比3∶1相互连接,转化大肠杆菌Escherichia coli DH10B感受态细胞进行蓝白斑筛选,挑取白色克隆,获得重组率较高的阳性克隆,构建了含有104个克隆的双元细菌人工染色体(BIBAC)基因组文库,并通过脉冲场电泳检测分析后确定,所构建的毛竹BIBAC文库平均插入片段为105 kb,约覆盖5倍毛竹基因组。该文库的构建为毛竹基因组研究做好了前期的基础工作。 展开更多
关键词 分子生物学 毛竹 双元细菌人工染色 基因组文库
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一种新型火鸡疱疹病毒细菌人工染色体的构建与鉴定 被引量:2
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作者 王志胜 刘芳 +3 位作者 许梦微 乔永峰 侯继波 王继春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2071-2080,共10页
拟构建一种新型火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组细菌人工染色体(BAC),通过同源重组方法将mini-F载体插入HVT基因组的糖蛋白C(glycoprotein C,gC)基因的等位位点得到mini-F重组HVT,提取重组病毒的DNA转入大肠杆菌DH10B细胞,再转入GS1783细胞获... 拟构建一种新型火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组细菌人工染色体(BAC),通过同源重组方法将mini-F载体插入HVT基因组的糖蛋白C(glycoprotein C,gC)基因的等位位点得到mini-F重组HVT,提取重组病毒的DNA转入大肠杆菌DH10B细胞,再转入GS1783细胞获得BAC,拯救病毒获得mini-F重组病毒和gC恢复病毒后,与亲本病毒(HVT FC126)比较生长动力学和对鸡马立克病的免疫效力。结果:获得数个BAC阳性克隆,取其中一个克隆(BAC^(HVT-G))成功拯救出HVT mini-F重组病毒(HVT^(BAC-ΔgC)),并成功获得了gC恢复毒株(HVT^(BAC-gC-R))。生长特性和免疫效力试验表明HVT^(BAC-gC-R)与HVT FC126无显著差异,而HVT^(BAC-ΔgC)增殖能力和免疫效力均明显下降。成功构建了HVT全基因组的感染性BAC;HVT的gC基因是一个非必需基因,但对病毒的增殖能力和免疫效力有重要影响。 展开更多
关键词 火鸡疱疹病毒 细菌人工染色 糖蛋白C 生长动力学 免疫效力
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小粒野生稻可转化人工染色体文库初步构建及筛选 被引量:2
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作者 王正华 曹筑荣 曹孟良 《国防科技大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第1期120-124,共5页
以小粒野生稻核DNA为材料构建了一个可转化人工染色体文库,获得了5000个克隆,平均插入片段约45 kb。稳定性检测结果表明,小粒野生稻基因组DNA能够在TAC载体中稳定存在。基于已克隆抗性基因的保守序列设计探针,利用菌落杂交的方法,对文... 以小粒野生稻核DNA为材料构建了一个可转化人工染色体文库,获得了5000个克隆,平均插入片段约45 kb。稳定性检测结果表明,小粒野生稻基因组DNA能够在TAC载体中稳定存在。基于已克隆抗性基因的保守序列设计探针,利用菌落杂交的方法,对文库进行筛选。结果表明,该文库可以用于抗性基因的筛选。 展开更多
关键词 可转化人工染色 基因组文库 小粒野生稻
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人工染色体载体系统的研究进展 被引量:1
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作者 姚春馨 吴成军 +1 位作者 程在全 黄兴奇 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第2期135-141,共7页
酵母人工染色体(YACs),细菌人工染色体(BACs),噬菌体P1衍生的人工染色体(P1 s),细菌人工染色体双元载体(B IBACs),具有转化能力的载体系统(TACs),哺乳动物人工染色体(MACs)和人工游离基因染色体(HAECs)等人工染色体载体系统,是近年来不... 酵母人工染色体(YACs),细菌人工染色体(BACs),噬菌体P1衍生的人工染色体(P1 s),细菌人工染色体双元载体(B IBACs),具有转化能力的载体系统(TACs),哺乳动物人工染色体(MACs)和人工游离基因染色体(HAECs)等人工染色体载体系统,是近年来不断发展起来的DNA克隆载体系统。作为一种重要的分子生物学技术,人工染色体载体系统在生物基因组测序分析,基因的结构与功能,表达与调控,定位与分离以及遗传病的基因治疗等研究领域得到了广泛的应用。本文着重介绍细菌人工染色体载体系统(BACs)的结构,功能及发展应用情况,同时比较和介绍了YACs,PACs,PBCs,B IBACs,TACs,MACs和HAECs等人工染色体载体系统的特点。 展开更多
关键词 人工染色 研究进展 YACs BACS
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绒山羊细菌人工染色体BAC文库构建条件的优化 被引量:1
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作者 刘志红 李宁 +6 位作者 任立明 胡晓湘 郭英 崔文涛 尹俊 张文广 李金泉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期55-58,共4页
近年来,细菌人工染色体BAC文库成为应用最广泛的基因组文库之一,它以其容量大、遗传特性稳定、嵌合体少、插入片段易回收、操作简便等不可比拟的优点而被广泛应用于基因组较大的真核生物基因组研究之中。作者就细菌人工染色体BAC文库的... 近年来,细菌人工染色体BAC文库成为应用最广泛的基因组文库之一,它以其容量大、遗传特性稳定、嵌合体少、插入片段易回收、操作简便等不可比拟的优点而被广泛应用于基因组较大的真核生物基因组研究之中。作者就细菌人工染色体BAC文库的构建条件进行了研究,用HindⅢ部分酶切绒山羊基因组,脉冲场凝胶电泳分离大片段DNA,以电洗脱法回收DNA后,与BAC载体连接,将连接产物点透析后,电转化DH10B感受态细胞,最后对转化的片段小提质粒进行NotⅠ酶切,脉冲电泳鉴定其大小。结果表明,本试验采用的方法既可获得较大的插入片段又可获得较高的转化效率,是较好的用于构建大基因组文库的方法。 展开更多
关键词 细菌人工染色 文库 构建条件
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细菌人工染色体文库基因组DNA制备技术 被引量:1
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作者 陈献伟 王会 +1 位作者 关伟军 高剑峰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第5期79-82,共4页
试验旨在对基因组DNA的制备进行研究,为细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)文库的构建奠定基础。以豁眼鹅全血为试验材料,提取高质量的基因组DNA,分别采用HindⅢ、EcoRⅠ和BamHⅠ3种限制性内切酶对所提基因组DNA进行... 试验旨在对基因组DNA的制备进行研究,为细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)文库的构建奠定基础。以豁眼鹅全血为试验材料,提取高质量的基因组DNA,分别采用HindⅢ、EcoRⅠ和BamHⅠ3种限制性内切酶对所提基因组DNA进行部分酶切,并利用控制酶切时间、设置不同的HindⅢ酶切浓度梯度对基因组DNA进行部分酶切。结果表明,HindⅢ为最佳限制性内切酶,并得到了最佳酶切用量(40U/μL)。该方法所制备的基因组DNA质量较好,可用于BAC文库的构建。 展开更多
关键词 细菌人工染色 基因组DNA 限制性内切酶 酶切
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细菌人工染色体载体系统在反向遗传学中的应用研究进展 被引量:1
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作者 丛彦龙 孙玉章 丁壮 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期81-84,共4页
细菌人工染色体是近十几年来发展起来的一种新型DNA克隆载体系统,具有操作简单、遗传稳定、容量大等明显的优势。论文主要综述了细菌人工染色体载体系统在基础研究、基因治疗及病毒载体疫苗等反向遗传学方面的研究进展。
关键词 细菌人工染色体(BAC) 载体系统 反向遗传学
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细菌人工染色体携带的表达FGF18-绿色荧光蛋白重组体的构建
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作者 孙德旭 秦苏萍 +2 位作者 王晓天 李小翠 刘志强 《山东医药》 CAS 2013年第19期11-14,共4页
目的构建由细菌人工染色体(BAC)携带的表达FGF18-绿色荧光蛋白(GFP)的重组体,用于生产转基因小鼠,筛选表达FGF18的特定细胞。方法分别克隆FGF18基因启动子区域的5'同源臂和3'同源臂,插入到pBS-GFP-kan质粒的左右两段,构建携带FG... 目的构建由细菌人工染色体(BAC)携带的表达FGF18-绿色荧光蛋白(GFP)的重组体,用于生产转基因小鼠,筛选表达FGF18的特定细胞。方法分别克隆FGF18基因启动子区域的5'同源臂和3'同源臂,插入到pBS-GFP-kan质粒的左右两段,构建携带FGF18同源臂的质粒。提取含有FGF18基因全长的bMQ-282D14 BAC,转化到SW105细菌中并筛选阳性克隆,之后再将带有FGF18基因同源臂的pBS-GFP-Kan质粒转化到该细菌内,在42℃实现基因同源重组,将GFP基因插入到FGF18基因的启动子区。结果经过氯霉素与卡那霉素的正负筛选,选出FGF18-GFP阳性的菌株,提取出构建好的BAC。结论成功构建了BAC携带的FGF18-GFP重组体,可用于转基因小鼠生产。 展开更多
关键词 FGF18 绿色荧光蛋白 细菌人工染色 同源重组
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利用细菌人工染色体文库(BAC)筛选猪乳蛋白基因
13
作者 赵兴波 铃木恒平 +1 位作者 李宁 吴常信 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期97-100,共4页
利用猪细菌人工染色体文库 (porcineBacteriaArtificialChromosome ,pBAC)的两步—四维PCR(twostep 4 DPCR)方法筛选猪乳清酸性蛋白 (WheyAcidicProtein ,WAP) ,αsl 酪蛋白 ,αs2 酪蛋白 ,β 酪蛋白 ,κ 酪蛋白的基因pBAC克隆 ,并提... 利用猪细菌人工染色体文库 (porcineBacteriaArtificialChromosome ,pBAC)的两步—四维PCR(twostep 4 DPCR)方法筛选猪乳清酸性蛋白 (WheyAcidicProtein ,WAP) ,αsl 酪蛋白 ,αs2 酪蛋白 ,β 酪蛋白 ,κ 酪蛋白的基因pBAC克隆 ,并提出了BAC基因文库一步—五维PCR(onestep 5 DPCR)筛选基因的方法。 展开更多
关键词 猪乳蛋白基因 细菌人工染色 PCR筛选法
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论人类人工染色体构建策略及其作为基因治疗载体的意义
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作者 唐冬生 夏家辉 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第11期58-62,共5页
结合作者本人的研究工作,对HAC构建的最新进展进行了综述,探讨并拓展了五种HAC构建策略,分析了第一代HAC解决的问题与存在的问题,以及第一代HAC作为基因治疗载体的价值,并提出了解决某些关键问题的策略。
关键词 人类人工染色 基因治疗 载体 HAC
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细菌人工染色体(BAC)文库在畜禽遗传资源保存中的应用
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作者 何丽 刘丑生 韩旭 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第10期188-192,共5页
作者介绍了国际畜禽遗传资源保存的研究现状与趋势,分析了细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)文库的发展和应用状况,阐述了BAC文库应用于畜禽遗传资源保存的特有优势,提出了建立BAC文库将成为畜禽遗传资源保存的一种... 作者介绍了国际畜禽遗传资源保存的研究现状与趋势,分析了细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)文库的发展和应用状况,阐述了BAC文库应用于畜禽遗传资源保存的特有优势,提出了建立BAC文库将成为畜禽遗传资源保存的一种重要补充形式,有利于提升畜禽遗传资源保存的安全性和长久性,也为今后进一步研究畜禽品种的特定性状提供了无可替代的材料,对实现全方位保存畜禽遗传资源具有重要的实用价值和推动作用。 展开更多
关键词 细菌人工染色体(BAC)文库 畜禽遗传资源保存 应用
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细菌人工染色体及其在马立克氏病病毒研究中的应用
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作者 杨承槐 李俊平 +1 位作者 李启红 黄建华 《中国兽药杂志》 2011年第3期52-55,共4页
简要介绍了细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)载体及其修饰技术,重点综述了BAC在马立克氏病病毒基因功能、疫苗研究中的应用。细菌人工染色体是近十几年发展起来的一种新型DNA克隆载体系统,具有操作简单、遗传稳定... 简要介绍了细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)载体及其修饰技术,重点综述了BAC在马立克氏病病毒基因功能、疫苗研究中的应用。细菌人工染色体是近十几年发展起来的一种新型DNA克隆载体系统,具有操作简单、遗传稳定、容量大等明显的优势,主要用于构建基因组文库、转基因动物模型、分子克隆化病毒等。 展开更多
关键词 细菌人工染色 载体 马立克氏病病毒 应用
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酵母人工染色体载体的改造和修饰
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作者 张忠明 Gres.,PM 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第1期10-13,共4页
将能在植物中表达的烟草花叶病毒CaMV35S启动子、GUS基因、潮霉素(Hygromycin)基因及NOS终止子组建到酵母人工染色体(YAC)载体,构建了具有能在植物细胞中表达和选择pYAV、GUS、pJS97/pJ... 将能在植物中表达的烟草花叶病毒CaMV35S启动子、GUS基因、潮霉素(Hygromycin)基因及NOS终止子组建到酵母人工染色体(YAC)载体,构建了具有能在植物细胞中表达和选择pYAV、GUS、pJS97/pJS98-HYYAC载体系统和一个标记YAC克隆的pUR43-HY质粒。 展开更多
关键词 酵母人工染色 烟草 植物 基因 烟草花叶病毒
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羊莫氏巴贝斯虫细菌人工染色体(BAC)文库的构建
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作者 张浩浩 陈龙欣 +3 位作者 曹阳 陈瑛 关贵全 马润林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1324-1329,共6页
为丰富巴贝斯虫基因组信息,选用感染中国羊的莫氏巴贝斯虫临潭株(Babesia motasi Lintan)为对象,将纯化的红细胞阶段虫体裂殖子包埋于低熔点琼脂糖,用蛋白酶K进行消化处理,得到巴贝斯虫基因组DNA,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分离大片段基... 为丰富巴贝斯虫基因组信息,选用感染中国羊的莫氏巴贝斯虫临潭株(Babesia motasi Lintan)为对象,将纯化的红细胞阶段虫体裂殖子包埋于低熔点琼脂糖,用蛋白酶K进行消化处理,得到巴贝斯虫基因组DNA,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分离大片段基因组DNA,将其与CopyControl pCC1BAC Cloning—ready Vector进行连接并转化到EPI300^(TM)Escherichia coli感受态细胞,成功构建了含有34 560个克隆的莫氏巴贝斯虫临潭株基因组细菌人工染色体(BAC)文库;文库的平均插入片段大小为70 kb,基因组覆盖度为×137,空载率均低于3%,且克隆稳定。该BAC文库的构建,为进一步绘制精细物理图谱、基因组测序、进化及利用比较基因组学筛选致病基因等方面的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 巴贝斯虫 基因组 细菌人工染色 文库
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我国濒危家养动物细菌人工染色体基因组文库的构建及应用
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作者 丁鸿 关伟军 马月辉 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第1期27-29,共3页
细菌人工染色体 (BAC)是新近发展起来的一种载体系统 ,具有克隆容量大 ,遗传特性稳定 ,转化效率高 ,易于操作等优点。在基因组文库构建和基因的快速克隆等方面已得到广泛应用。濒危家养动物细菌人工染色体基因组文库构建的目的在于有效... 细菌人工染色体 (BAC)是新近发展起来的一种载体系统 ,具有克隆容量大 ,遗传特性稳定 ,转化效率高 ,易于操作等优点。在基因组文库构建和基因的快速克隆等方面已得到广泛应用。濒危家养动物细菌人工染色体基因组文库构建的目的在于有效、永久保存和利用其基因资源、快速克隆重要经济和抗逆性状基因以及为广泛、深入开展分子生物学研究提供宝贵的材料。 展开更多
关键词 濒危家养动物 细菌人工染色 基因组文库 保存
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古玉的沁色、染色及鉴别 被引量:4
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作者 许小玲 《宝石和宝石学杂志》 CAS 2001年第2期26-28,共3页
对古玉颜色的鉴别是玉器鉴赏与断代的重要依据。分析了古玉中的各种沁色与染色方法 ,阐述了古玉中沁色与染色的区别及鉴别方法。
关键词 古玉 沁色 鉴别 人工染色 生坑 熟坑 盘色
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