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重亚硫酸氢盐测序法检测Wnt信号通路抑制基因在急性早幼粒细胞白血病细胞中甲基化变化 被引量:8
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作者 晏建国 付海英 +5 位作者 沈建箴 周华蓉 张媛媛 黄劲龙 陈聪杰 黄思晗 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1299-1304,共6页
目的:应用重亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4)Wnt信号通路抑制基因启动子区CPG岛的甲基化状态,筛选NB4细胞中高甲基化的Wnt信号通路抑制基因,并探讨BSP法作为定量研究基因甲基化方... 目的:应用重亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4)Wnt信号通路抑制基因启动子区CPG岛的甲基化状态,筛选NB4细胞中高甲基化的Wnt信号通路抑制基因,并探讨BSP法作为定量研究基因甲基化方法的优缺点。方法:以NB4细胞为研究对象,20例健康人单个核细胞为对照;常规提取DNA并用亚硫酸氢盐处理,然后用PCR扩增目标序列,应用重亚硫酸氢盐测序法(BSP)分析在NB4细胞中Wnt信号通路抑制基因基因的甲基化状态。并通过与甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,M SP)、焦磷酸测序技术(pyrosequencing)比较、评价BSP法检测NB4细胞Wnt信号通路抑制基因甲基化状态的优缺点。结果:BSP产物克隆测序检测NB4细胞Wnt信号通路抑制基因甲基化发生率分别为:WIF-1基因95.26%,DKK3基因86%,SFRP1基因81.67%,SFRP2基因95.71%,SFRP4基因85%,SFRP5基因95%;20例健康人单个核细胞为对照组中Wnt信号通路抑制基因甲基化发生率分别为:WIF-1基因1.5%,DKK3基因4.2%,SFRP1基因0%,SFRP2基因0.9%,SFRP4基因2.5%,SFRP5基因1.75%。与正常人M NC相比,NB4细胞的Wnt信号通路相关抑制基因启动子甲基化率明显增高。结论:急性早幼粒细胞株NB4细胞中存在Wnt信号通路多个抑制基因高甲基化状态。此类基因异常甲基化有可能成为急性早幼粒细胞白血病的早期诊断指标和治疗靶点。 展开更多
关键词 亚硫酸氢盐测序法 Wnt信号通路抑制基因 基因甲基化 急性早幼粒细胞白血病 NB4细胞
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亚硫酸氢盐修饰方法在DNA甲基化检测中的研究进展 被引量:3
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作者 何纯刚 黄沁园 +2 位作者 陈利生 吴鸿根 邓洪强 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第6期990-992,共3页
随着人类基因组测序工作的基本完成.基因表达的调控成为21世纪分子遗传学研究的热点领域。而作为基因表达调控的一个重要机制——表观遗传学改变的研究倍受广大研究者的关注。DNA甲基化在人类表观遗传、胚胎发育、基因印记、等位基因... 随着人类基因组测序工作的基本完成.基因表达的调控成为21世纪分子遗传学研究的热点领域。而作为基因表达调控的一个重要机制——表观遗传学改变的研究倍受广大研究者的关注。DNA甲基化在人类表观遗传、胚胎发育、基因印记、等位基因失活及肿瘤发生等有着非常重要的作用。DNA甲基化的研究也成为目前研究的热点,然而制约其发展的仍然是技术与方法. 展开更多
关键词 DNA甲基化 甲基化检测 亚硫酸氢盐 修饰方法 基因表达调控 人类基因组 分子遗传学 遗传学改变
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不同气候下亚硫酸氢盐对红富士苹果叶片光合色素含量和果实生长量的影响 被引量:2
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作者 陈屏昭 桑正林 +3 位作者 何嵋 黄先敏 张泽俊 王锐 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期77-83,共7页
为观察不同气候条件下,亚硫酸氢盐对红富士叶片光合色素含量和果实生长量的影响,以10~11年生盛果期红富士苹果树为试材,分别在高温、多日照干旱年份和低温、寡日照多雨年份进行外源喷施5 mmol&#183; L-1的NaHSO3和KHSO3溶液的试验... 为观察不同气候条件下,亚硫酸氢盐对红富士叶片光合色素含量和果实生长量的影响,以10~11年生盛果期红富士苹果树为试材,分别在高温、多日照干旱年份和低温、寡日照多雨年份进行外源喷施5 mmol&#183; L-1的NaHSO3和KHSO3溶液的试验,以喷清水为对照。结果显示,无论是高温、多日照干旱年份还是低温、寡日照多雨年份,两种亚硫酸氢盐处理组叶片的光合色素含量和果实生长量均显著高于同期对照组,且KH-SO3的作用效果优于NaHSO3;相同处理组间,低温、寡日照多雨年份的光合色素含量显著高于高温、多日照干旱年份,而果实生长量却明显比干旱、高温、多日照年份低。 展开更多
关键词 气候条件 亚硫酸氢盐 红富士苹果 光合色素 果实生长量
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亚硫酸氢盐预处理对黄贮玉米秸秆产甲烷潜力机理研究 被引量:3
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作者 苏小红 王欣 +5 位作者 王玉鹏 赵娴 陆佳 秦国辉 周闯 刘伟 《中国沼气》 2022年第3期50-57,共8页
为了更好地解决东北寒区农作物秸秆环境污染、资源浪费、转化利用率低的问题,开展了亚硫酸氢盐与黄贮法联用处理玉米秸秆对其产气潜力影响的研究。结果表明:当预处理液中亚硫酸氢钠浓度为6.0%时,预处理后的玉米秸秆酶解糖化率达83.0%左... 为了更好地解决东北寒区农作物秸秆环境污染、资源浪费、转化利用率低的问题,开展了亚硫酸氢盐与黄贮法联用处理玉米秸秆对其产气潜力影响的研究。结果表明:当预处理液中亚硫酸氢钠浓度为6.0%时,预处理后的玉米秸秆酶解糖化率达83.0%左右,甲烷日产量达131.3 mL·g^(-1)TS,甲烷累积产气量达1462.2 mL·g^(-1)TS。相对于单一黄贮预处理法,采用联合法预处理后玉米秸秆组分中木质素被大量降解,纤维素保留率,结构疏散,纤维素、半纤维素可生化性提高,产气效果较好,有利于后续资源化的利用,且在一定范围内较低的亚硫酸氢钠用量好于较高的亚硫酸氢钠用量,所以亚硫酸氢钠用量在4.0%~5.0%为宜。适用于寒区秸秆资源化处理与利用的工程前预处理,且能节约成本,具有较好的经济效益、环境效益、社会效益。 展开更多
关键词 黄贮 亚硫酸氢盐 预处理 玉米秸秆 甲烷
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亚硫酸氢盐-基因组测序法在检测基因异常甲基化中的应用 被引量:2
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作者 陈立军 王玮 +2 位作者 于利人 倪虹 呼文亮 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第22期1280-1283,共4页
目的:介绍一种准确、敏感的检测多个标本、多个CG二核苷酸甲基化状态的方法。即亚硫酸氢盐-基因组测序法(BisulfiteGenomicSequencing,BGS)。方法:单链DNA的胞嘧啶可被亚硫酸氢盐修饰转变成尿嘧啶,而5'甲基胞嘧啶仍保持不变。这种... 目的:介绍一种准确、敏感的检测多个标本、多个CG二核苷酸甲基化状态的方法。即亚硫酸氢盐-基因组测序法(BisulfiteGenomicSequencing,BGS)。方法:单链DNA的胞嘧啶可被亚硫酸氢盐修饰转变成尿嘧啶,而5'甲基胞嘧啶仍保持不变。这种修饰处理可在甲基化和非甲基化基因组DNA间产生DNA序列差异,而这种DNA序列差异可通过BGS法较为灵敏地筛查出。利用该原理检测肝癌细胞AFP基因启动子区CG二核苷酸甲基化状态。结果:在癌细胞中发现两种异常甲基化,即高度甲基化及部分甲基化。结论:BGS法在基因甲基化检测中将有很大的应用潜能,为探讨肿瘤发生机制提供了新的分子分析方向。 展开更多
关键词 亚硫酸氢盐-基因组测序法 甲基化 甲胎蛋白
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亚硫酸氢盐对云南昭通红富士苹果产量和品质的影响 被引量:2
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作者 陈屏昭 何嵋 +3 位作者 黄先敏 薛梅 张泽俊 许云 《中国果树》 北大核心 2014年第1期31-34,共4页
云南省昭通市2011_2012年天气异常,2011年高温、强13照、干旱,2012年低温、寡13照、多雨。在此天气条件下以10—11年生盛果期红富士苹果树为试材,分别进行了外源喷施5mmol/L的NaHS03和KHSO,溶液试验,并以喷水为对照。结果显示,... 云南省昭通市2011_2012年天气异常,2011年高温、强13照、干旱,2012年低温、寡13照、多雨。在此天气条件下以10—11年生盛果期红富士苹果树为试材,分别进行了外源喷施5mmol/L的NaHS03和KHSO,溶液试验,并以喷水为对照。结果显示,干旱、高温、强日照年份和多雨、低温、寡日照年份NaHSO,和KHSO,处理均可提高红富士单果重、株产和果实品质。但多雨、低温、寡日照年份,其作用效果不如干旱、高温、强日照年份。 展开更多
关键词 亚硫酸氢盐 苹果 红富士 单果重 株产 品质 天气
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DNA甲基化检测中亚硫酸氢盐修饰方法的改进与评价 被引量:1
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作者 叶松山 刘先娟 +2 位作者 侯俊然 毛秉豫 邱耕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期611-615,共5页
目的:建立一种快速便捷的亚硫酸氢盐修饰DNA方法用于DNA甲基化检测。方法:提高亚硫酸氢盐浓度及修饰温度、缩短修饰时间并用玻璃奶回收DNA改进DNA修饰方法,用亚硫酸氢盐测序法分析MAGE-A3基因和DAP-K基因目的片段中胞嘧啶转化为胸腺嘧... 目的:建立一种快速便捷的亚硫酸氢盐修饰DNA方法用于DNA甲基化检测。方法:提高亚硫酸氢盐浓度及修饰温度、缩短修饰时间并用玻璃奶回收DNA改进DNA修饰方法,用亚硫酸氢盐测序法分析MAGE-A3基因和DAP-K基因目的片段中胞嘧啶转化为胸腺嘧啶的效率,评价改进方法与传统方法、试剂盒方法对DNA的修饰效果。结果:改进的方法可将操作过程缩短到3 h左右;非甲基化的胞嘧啶到胸腺嘧啶的转化率超过99%,与传统方法、试剂盒方法相比差异无统计学意义(χ~2=0.0564,P>0.05);只针对非甲基化的胞嘧啶进行转化修饰,而在对甲基化胞嘧啶过度修饰为胸腺嘧啶方面与传统方法无统计学差异(χ~2=0.0149,P>0.05)。结论:改进的亚硫酸氢盐DNA修饰方法修饰效率高,对甲基化的胞嘧啶过度修饰影响不显著,且具有节省时间,操作简便等优点。 展开更多
关键词 DNA甲基化 表观遗传学 亚硫酸氢盐测序 DNA修饰
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应用亚硫酸氢盐修饰后PCR联合TA克隆测序对E-cadherin启动子区甲基化水平的检测 被引量:1
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作者 贾文亮 张庆瑜 +2 位作者 李素丽 周芳 张安玲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期611-616,共6页
E-cadherin是一种细胞粘附因子,通过增强细胞之间的粘附而起到抑制肿瘤转移的作用.Ecadherin基因启动子区的高甲基化是导致其在众多肿瘤细胞中表达下调甚至缺失的主要原因之一.本实验首先抽提SGC-7901细胞(胃腺癌细胞)、A549细胞(肺腺... E-cadherin是一种细胞粘附因子,通过增强细胞之间的粘附而起到抑制肿瘤转移的作用.Ecadherin基因启动子区的高甲基化是导致其在众多肿瘤细胞中表达下调甚至缺失的主要原因之一.本实验首先抽提SGC-7901细胞(胃腺癌细胞)、A549细胞(肺腺癌细胞)、MCF-7细胞(乳腺癌细胞)等3个肿瘤细胞株的全基因组DNA,然后对抽提的DNA进行亚硫酸氢盐修饰和纯化回收,根据修饰后的DNA序列设计引物并对其进行PCR扩增.然后将PCR扩增产物与pUC-T TA载体连接并转化入感受态大肠杆菌DH5α中进行培养,对筛选出的含有阳性重组子的菌落进行测序.测序结果显示,3个肿瘤细胞株的E-cadherin基因启动子区的CpG岛都呈现了高度的甲基化,亚硫酸氢盐的修饰效率达到了99.2%.综上研究表明,亚硫酸氢盐修饰后PCR(BSP)联合TA克隆测序可以对肿瘤细胞某基因启动子区CpG岛的甲基化水平进行精确量化,研究所使用的3个肿瘤细胞株均可作为研究肿瘤细胞E-cadherin基因甲基化的细胞模型. 展开更多
关键词 甲基化 亚硫酸氢盐修饰后PCR E-CADHERIN
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亚硫酸氢盐叶面喷施液对红富士苹果作用时间及效果研究 被引量:2
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作者 陈屏昭 吴银梅 +3 位作者 袁晓春 何嵋 代勋 熊汝琴 《浙江农业科学》 2013年第3期280-282,共3页
以10年生红富士苹果树为试材,对比观察了NaHSO3和KHSO32种喷施液短期内对叶片光合色素含量和果实生长量的影响。结果显示,喷施处理后,叶片叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素b含量呈现同步显著升高而后又降低的趋势;果实的生长量明显增加。... 以10年生红富士苹果树为试材,对比观察了NaHSO3和KHSO32种喷施液短期内对叶片光合色素含量和果实生长量的影响。结果显示,喷施处理后,叶片叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素b含量呈现同步显著升高而后又降低的趋势;果实的生长量明显增加。喷施处理10 d后,果实总增量分别比对照高5.64和6.28 g,表明2种亚硫酸氢盐均有促进果实生长发育、提高果实产量的作用。 展开更多
关键词 亚硫酸氢盐 红富士苹果 光合色素 生长量
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亚硫酸氢盐在SPORL法预处理稻草中的作用 被引量:5
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作者 李洲 王高升 +2 位作者 王霞 肖林 夏蕊蕊 《中国造纸学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期1-6,共6页
为了提高稻草的酶水解葡萄糖得率,研究了SPORL法预处理对稻草主要成分含量的影响及主要成分的保留与纤维素酶水解效率的关系。结果表明,在SPORL法预处理过程中,亚硫酸氢盐对稻草的木素、纤维素、半纤维素和灰分均有影响,增加亚硫酸氢盐... 为了提高稻草的酶水解葡萄糖得率,研究了SPORL法预处理对稻草主要成分含量的影响及主要成分的保留与纤维素酶水解效率的关系。结果表明,在SPORL法预处理过程中,亚硫酸氢盐对稻草的木素、纤维素、半纤维素和灰分均有影响,增加亚硫酸氢盐用量能够促进木素脱除和半纤维素水解,从而破除纤维素酶与纤维素接触的空间障碍,促进预处理稻草酶水解;增加亚硫酸氢盐用量还有利于提高预处理稻草纤维素保留率。木素的溶出与预处理稻草酶水解效率呈较好的正相关关系,这是SPORL法预处理与稀酸法的不同之处。 展开更多
关键词 亚硫酸氢盐 SPORL法 稻草 预处理 酶水解
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利用人类全基因组亚硫酸氢盐测序数据检测CNVs的研究 被引量:1
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作者 徐丹同 王祎菲 +6 位作者 蔡佳丽 龚文滔 潘向春 田雨晗 沈箐鹏 李加琪 袁晓龙 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期324-340,共17页
DNA甲基化异常可能导致拷贝数变异(copy number variants,CNVs)的发生,而CNVs的发生又可能改变DNA甲基化水平。全基因组亚硫酸氢盐测序(whole genome bisulfite sequencing,WGBS)技术能够获得DNA水平的测序数据,具有挖掘CNVs的潜力和优... DNA甲基化异常可能导致拷贝数变异(copy number variants,CNVs)的发生,而CNVs的发生又可能改变DNA甲基化水平。全基因组亚硫酸氢盐测序(whole genome bisulfite sequencing,WGBS)技术能够获得DNA水平的测序数据,具有挖掘CNVs的潜力和优势,但利用WGBS数据挖掘CNVs的效果尚不清楚。本研究选取了5款检测CNVs不同策略的软件(BreakDancer、cn.mops、CNVnator、DELLY、Pindel),基于人类的真实(2.62 billion reads)和模拟(12.35 billion reads)测序数据,进行150次CNVs检测,评估CNVs检出数量、精确率、召回率、相对检出能力、内存占用和运行时间等指标,旨在讨论利用WGBS数据检测CNVs的最佳方案。基于真实WGBS数据,Pindel检出缺失型和重复型CNVs的数量最多,CNVnator对缺失型CNVs的检测精确率最高,cn.mops对重复型CNVs的检测精确率最高,Pindel对缺失型CNVs的召回率最高,cn.mops对重复型CNVs的召回率最高。基于模拟WGBS数据,BreakDancer检出缺失型CNVs数量最多,cn.mops检出重复型CNVs数量最多,CNVnator对缺失型和重复型CNVs的检测精确率和召回率均为最高。与全基因组测序数据相比,CNVnator在真实和模拟WGBS数据中检出CNVs的能力与之相当。此外,DELLY和BreakDancer的内存占用峰值和CPU运行时间最小,CNVnator的内存占用峰值和CPU运行时间最大。结果表明,利用WGBS数据检测CNVs具有可行性,使用CNVnator和cn.mops在WGBS数据上检测CNVs的准确率较高,这些工作为利用WGBS数据深入研究CNVs和DNA甲基化之间的相互关系提供一定的参考和帮助。 展开更多
关键词 全基因组亚硫酸氢盐测序 拷贝数变异 软件评估
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活化亚硫酸(氢)盐降解有机污染物的研究进展 被引量:3
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作者 齐亚兵 贾宏磊 《材料导报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第3期53-65,共13页
与过硫酸盐相比,亚硫酸(氢)盐价格低廉,来源广泛,毒性更低。活化亚硫酸(氢)盐过程不但可产生强氧化性的SO_(4)^(·-)和SO_(5)^(·-),还可产生兼具氧化性和还原性的SO_(3)^(·-),因此,活化亚硫酸(氢)盐在降解有机污染物的同... 与过硫酸盐相比,亚硫酸(氢)盐价格低廉,来源广泛,毒性更低。活化亚硫酸(氢)盐过程不但可产生强氧化性的SO_(4)^(·-)和SO_(5)^(·-),还可产生兼具氧化性和还原性的SO_(3)^(·-),因此,活化亚硫酸(氢)盐在降解有机污染物的同时可实现自身的氧化,不会造成二次污染,具有广阔的发展前景。活化亚硫酸(氢)盐的方式主要包括光活化、过渡金属活化、炭质材料活化和电化学活化等。本文简述了活化亚硫酸(氢)盐的机制,综述了活化亚硫酸(氢)盐降解有机污染物的研究进展,解析了活化亚硫酸(氢)盐降解有机污染物的影响因素,分析了活化亚硫酸(氢)盐降解有机污染物存在的问题,展望了活化亚硫酸(氢)盐降解有机污染物的发展趋势,以期为相关学者的后续研究工作提供一定的参考。目前活化亚硫酸(氢)盐降解有机污染物技术还处于实验室研究阶段,未见相关工业应用的报道。假以时日,如若技术成熟,活化亚硫酸(氢)盐在有机污染物的降解领域必将占有一席之地。 展开更多
关键词 高级氧化技术 亚硫酸() 活化 降解 自由基 有机污染物
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咔唑基近红外亚硫酸氢根荧光探针及其在水样和生物成像中的应用 被引量:1
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作者 周金涛 朱天翔 +2 位作者 尚主业 张志强 孟庆涛 《发光学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2066-2073,共8页
亚硫酸氢盐(HSO_(3)^(-))作为一种重要的食品添加剂,在日常生活中被广泛使用,但过量的使用和滥用会对生物和环境造成有害影响。同时,HSO_(3)^(-)作为体内信号分子(SO_(2))的衍生物,在正常生理活动中发挥着巨大的作用,但体内HSO_(3)^(-)... 亚硫酸氢盐(HSO_(3)^(-))作为一种重要的食品添加剂,在日常生活中被广泛使用,但过量的使用和滥用会对生物和环境造成有害影响。同时,HSO_(3)^(-)作为体内信号分子(SO_(2))的衍生物,在正常生理活动中发挥着巨大的作用,但体内HSO_(3)^(-)的异常表达和过量摄入会导致一些疾病的发生。因此,对于体内和环境中HSO_(3)^(-)的特异性和敏感性检测和监测具有重要意义。为此本文选用N-乙基-咔唑作为电子供体基团,2-氧代-4-苯基-2,5-二氢-3-呋喃甲腈作为电子受体基团,通过羟醛缩合反应合成了具有D-π-A结构的近红外HSO_(3)^(-)荧光探针(CL)。探针CL识别HSO_(3)^(-)后其近红外荧光下降且波长发生蓝移。通过高分辨质谱(HR-MS)和理论计算验证了探针CL对HSO_(3)^(-)的亲核加成传感机制。探针CL具有近红外发射(λ_(em)=685 nm)、较大的Stokes位移(195 nm)、良好的选择性以及高灵敏度(49 nmol/L)等优点。另外,探针CL已被制备成试纸,并与智能手机连用实现了水样中HSO_(3)^(-)的现场快速检测。最重要的是,该探针已成功应用于活鼠体内HSO_(3)^(-)的荧光成像。 展开更多
关键词 亚硫酸氢盐 荧光探针 咔唑衍生物 环境水样 活体成像
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固体碳酸盐催化烃化反应合成止咳酮的研究(Ⅰ) 被引量:1
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作者 布添垣 谢思娟 +1 位作者 高志勇 张少璋 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 1991年第1期73-76,共4页
在无溶剂的条件下,采用固体碱性碳酸钾、乙酰乙酸乙酯和苄氯进行固-液相烃化反应,合成止咳酮。烃化温度115—125℃,烃化时间1.5小时,产率:40%~45%。
关键词 烃化反应 止咳酮 亚硫酸氢盐 合成
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DNA甲基化修饰对金钱鱼卵巢Cyp17a1表达水平的影响 被引量:1
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作者 周一帆 江政霆 +5 位作者 李雨 焦开智 潘书慧 许芮 李广丽 江东能 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期46-53,共8页
【目的】分析DNA甲基化修饰对金钱鱼(Scatophagus argus)卵巢Cyp17a1表达的影响,进一步认识卵巢发育成熟相关基因表达的调控机制。【方法】分别取卵巢发育III、IV期的金钱鱼,以及投喂添加0(对照)、50、100μg/g雌二醇饲料30 d的2龄雌鱼,... 【目的】分析DNA甲基化修饰对金钱鱼(Scatophagus argus)卵巢Cyp17a1表达的影响,进一步认识卵巢发育成熟相关基因表达的调控机制。【方法】分别取卵巢发育III、IV期的金钱鱼,以及投喂添加0(对照)、50、100μg/g雌二醇饲料30 d的2龄雌鱼,用MethPrimer软件分析其Cyp17a1基因CpG二核苷酸位点分布特征,并预测CpG岛;采用亚硫酸氢盐测序法检测不同发育时期卵巢以及投喂雌二醇个体卵巢中的Cyp17a1的DNA甲基化修饰水平,并用实时荧光定量PCR分析Cyp17a1基因表达水平。【结果】金钱鱼Cyp17a1翻译起始位点2000 bp后无CpG岛,取第1外显子含有5个CpG位点(翻译起始位点后106、116、129、148和203 bp处)的区域用于DNA甲基化水平检测。金钱鱼III期卵巢Cyp17a1外显子1的DNA甲基化修饰水平显著高于IV期卵巢(P<0.05),与其mRNA表达水平呈负相关。116、129和203 bp处DNA甲基化存在发育时期差异,但106和148 bp处差异不显著(P>0.05)。投喂雌二醇后,金钱鱼卵巢Cyp17a1 mRNA表达水平和第1外显子CpG富集区域整体DNA甲基化修饰水平无显著变化(P>0.05),但雌激素处理雌鱼翻译起始位点后148、203 bp处甲基化水平明显上升(P<0.05)。【结论】金钱鱼卵巢Cyp17a1第一个外显子CpG富集区的整体甲基化水平与基因表达呈负相关,饲料E2可上调Cyp17a1第一个外显子148、205 bp处甲基化水平,表明甲基化修饰参与金钱鱼Cyp17a1的表达调控。 展开更多
关键词 金钱鱼 Cyp17a1 基因表达 亚硫酸氢盐测序法 DNA甲基化
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二氧化硫吸入对大鼠脑组织细胞的氧化损伤作用 被引量:16
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作者 孟紫强 张波 《中国环境科学》 EI CAS CSSCI CSCD 北大核心 2001年第5期464-467,共4页
研究了低浓度二氧化硫(SO2 ) 对大鼠中枢神经系统毒理作用的机理,以及SO2 (28mg/m3)吸入对大鼠脑组织细胞抗氧化酶活性和脂质过氧化水平的影响.结果表明,SO2吸入可引起超氧化物歧化酶(Cu、Zn-SOD)活性降低、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)... 研究了低浓度二氧化硫(SO2 ) 对大鼠中枢神经系统毒理作用的机理,以及SO2 (28mg/m3)吸入对大鼠脑组织细胞抗氧化酶活性和脂质过氧化水平的影响.结果表明,SO2吸入可引起超氧化物歧化酶(Cu、Zn-SOD)活性降低、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性升高、过氧化氢酶(CAT)活性无明显改变以及脑组织脂质过氧化水平显著升高.这些结果意味着SO2通过产生活性氧自由基引起脂质及其他生物大分子的氧化损伤,可能是低浓度SO2毒理作用的机制之一. 展开更多
关键词 二氧化硫 亚硫酸氢盐 抗氧化酶 脂质过氧化 活性氧基 脑组织细胞 氧化损伤作用 大鼠
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WT1和FGF9基因在克隆猪隐睾中mRNA表达和DNA甲基化状态分析 被引量:3
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作者 李芳芳 戴建军 +5 位作者 吴彩凤 张树山 张德福 顾晓龙 吴鋆龙 王昕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期918-925,共8页
为探究本课题组获得的2头体细胞克隆猪隐睾症形成的可能原因,本研究利用相对荧光定量PCR技术检测了WT1和FGF9基因在睾丸组织中mRNA表达量变化,同时利用亚硫酸氢盐测序法分析了其启动子区CpG岛甲基化状态。结果表明:WT1和FGF9基因在2头... 为探究本课题组获得的2头体细胞克隆猪隐睾症形成的可能原因,本研究利用相对荧光定量PCR技术检测了WT1和FGF9基因在睾丸组织中mRNA表达量变化,同时利用亚硫酸氢盐测序法分析了其启动子区CpG岛甲基化状态。结果表明:WT1和FGF9基因在2头克隆猪睾丸中表达量均高于对照组,其中克隆猪C1中2个基因的表达量与对照组相比差异明显(3.49、9.83 vs 1.00)。亚硫酸氢盐测序结果显示,WT1基因启动子区在克隆猪C1和C2中的甲基化程度没有明显变化,而FGF9基因启动子区2个CpG岛在克隆猪C1中甲基化程度高于对照猪N(94.54%vs 18.18%,71.11%vs 26.67%),而在克隆猪C2中不明显。综上表明:WT1基因的异常表达可能是引起克隆猪发生隐睾的原因之一,但其甲基化水平不是影响该基因异常表达的因素;克隆猪C1睾丸组织FGF9基因启动子区发生超甲基化,这可能导致其mRNA表达异常,从而成为诱导克隆猪隐睾发生的可能原因。 展开更多
关键词 隐睾 克隆猪 甲基化 亚硫酸氢盐测序
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RG108对猪胎儿成纤维细胞甲基化水平及克隆胚胎发育的影响 被引量:2
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作者 顾晓龙 张廷宇 +8 位作者 戴建军 吴彩凤 张树山 徐利 李翔 韩晓 李芳芳 曾宪垠 张德福 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期14-21,共8页
本研究使用RG108处理猪胎儿成纤维细胞(Porcine fetal fibroblast,PFF),研究其对细胞甲基化水平和核移植效率的影响。使用0.05、0.5、5和50μmol·L-1RG108分别处理细胞24、48和72 h后,用高效液相色谱和亚硫酸氢盐测序(Bisulfite se... 本研究使用RG108处理猪胎儿成纤维细胞(Porcine fetal fibroblast,PFF),研究其对细胞甲基化水平和核移植效率的影响。使用0.05、0.5、5和50μmol·L-1RG108分别处理细胞24、48和72 h后,用高效液相色谱和亚硫酸氢盐测序(Bisulfite sequencing PCR,BSP)法分析细胞整体甲基化水平和印迹基因H19和IGF2R的DMR区甲基化率,并检测RG108处理对细胞生长、凋亡、染色体变化及随后的核移植效率的影响。整体甲基化水平结果通过两因素方差分析,发现RG108处理浓度与处理时间无交互作用,处理浓度间细胞甲基化水平差异不显著,但处理时间却能显著的影响甲基化水平,且50μmol·L-1RG108处理细胞72 h后整体甲基化水平显著低于对照组。BSP分析结果表明,5和50μmol·L-1处理PFF 72 h后H19的DMR区域甲基化率显著降低。RG108对细胞生长有一定的抑制作用,且0.5、5和50μmol·L-1组经处理72 h后凋亡比例显著提高,但对细胞的染色体数目没有显著影响。PFF经5和50μmol·L-1RG108处理72 h后能显著提高卵裂率和囊胚细胞数,且5μmol·L-1组囊胚率也显著提高。结果表明,RG108降低细胞整体甲基化水平呈时间依赖性,且同时降低H19的DMR区域甲基化率。PFF经5μmol·L-1浓度处理72 h组能显著提高核移植胚胎效率。 展开更多
关键词 克隆猪 RG108 甲基化 细胞凋亡 核移植 亚硫酸氢盐测序
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SOX11基因甲基化与宫颈癌的相关性研究 被引量:4
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作者 吴晓玲 崔雨蒙 +3 位作者 厉云 李晓芳 杨阳 高艳娥 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期249-254,共6页
目的检测正常宫颈组织、宫颈癌组织及宫颈癌细胞系中SOX11基因的甲基化状态并探讨甲基化状态与SOX11基因表达的关系。方法亚硫酸氢盐测序法及TA克隆分析正常宫颈、宫颈癌组织及宫颈癌细胞系中SOX11基因启动子区DNA的甲基化状态。RT-PCR... 目的检测正常宫颈组织、宫颈癌组织及宫颈癌细胞系中SOX11基因的甲基化状态并探讨甲基化状态与SOX11基因表达的关系。方法亚硫酸氢盐测序法及TA克隆分析正常宫颈、宫颈癌组织及宫颈癌细胞系中SOX11基因启动子区DNA的甲基化状态。RT-PCR检测宫颈癌细胞系、宫颈癌组织及正常宫颈组织中SOX11基因mRNA表达。结果宫颈癌组织中SOX11基因呈高甲基化状态,平均甲基化率为81.07%,远高于正常宫颈组织中SOX11甲基化率(12.86%),差异具有统计学意义(P<0.001)。宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33-A和CaSki中SOX11均呈高甲基化状态,其甲基化率分别为90.71%、97.14%、77.14%、99.64%。宫颈癌组织中SOX11基因mRNA的表达量远低于正常宫颈组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.001)。SOX11基因的表达与其启动子区高甲基化呈负相关(P<0.001,r=-0.808)。经去甲基化剂5-氮杂胞苷处理后,在宫颈癌细胞系中SOX11 mRNA的表达水平明显升高。宫颈癌HPV感染可能增加SOX11启动子甲基化发生。结论宫颈癌组织中SOX11基因启动子区的DNA高甲基化而使其表达沉默。 展开更多
关键词 宫颈癌 SOX11基因 亚硫酸氢盐测序法 甲基化
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Rotor-Gene链融解曲线法甲基化标记筛选技术的建立 被引量:1
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作者 莫耀南 赵贵森 +2 位作者 郑海燕 刘良 杨渝珍 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2008年第1期116-119,共4页
目的:建立基于Rotor-Gene的链融解曲线法的甲基化标记筛选技术,分析各种影响因素,评估其实用性。方法:克隆Hela细胞雄激素受体基因外显子-1的Bisulfite-PCR产物,挑出经测序证实的可以代表不同甲基化程度的一组质粒,并以之为模板,在Rotor... 目的:建立基于Rotor-Gene的链融解曲线法的甲基化标记筛选技术,分析各种影响因素,评估其实用性。方法:克隆Hela细胞雄激素受体基因外显子-1的Bisulfite-PCR产物,挑出经测序证实的可以代表不同甲基化程度的一组质粒,并以之为模板,在Rotor-Gene3000实时定量PCR仪进行扩增和链融解,分析融链温度、链融解曲线与甲基化程度、甲基化模式的相关性及各种影响因素。结果:基于Rotor-Gene的链融解曲线法,不仅可以区分甲基化与非甲基化,而且能够鉴别片段内细微的甲基化差异;主要的影响因素有升温幅度、缓冲液离子强度、产物浓度等。结论:基于Rotor-Gene的链融解曲线法,可以集扩增和链融解于一体,是一种经济简便的甲基化分析技术,可用于样品的甲基化筛选。 展开更多
关键词 DNA甲基化 链融解曲线法 亚硫酸氢盐 雄激素受体
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